[发明专利]一种快速构建丝状真菌表达载体的方法在审
| 申请号： | 201910525376.7 | 申请日： | 2019-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN110305886A | 公开（公告）日： | 2019-10-08 |
| 发明（设计）人： | 梅艳珍;戴传超;杨倩 | 申请（专利权）人： | 南京师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/65;C12N15/80 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 吴爽 |
| 地址： | 210024 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种快速构建丝状真菌表达载体的方法，主要过程为：分别克隆酵母质粒复制模块、细菌质粒复制模块、丝状真菌复制模块及其相应的启动子序列，各片段间具有首尾相连接的同源臂约20‑50 bp，采用电转化技术得到含有三模块的质粒，该质粒可用于非模式丝状真菌自身启动子强弱的快速鉴定、关键酶基因表达、次级代谢产物生物合成、内生菌与植物的相互作用研究等。本发明提供的方法快速、准确性高、无需使用限制性内切酶、可用于多片段和长片段载体的构建或替换，弥补了现有丝状真菌载体构建过程中限制性内切酶选择难及不适用于多片段或长片段的缺陷。 | ||
| 搜索关键词： | 丝状真菌 复制模块 限制性内切酶 表达载体 快速构建 长片段 可用 质粒 次级代谢产物 关键酶基因 启动子序列 自身启动子 酵母质粒 快速鉴定 生物合成 细菌质粒 载体构建 电转化 内生菌 同源臂 构建 首尾 替换 克隆 强弱 研究 | ||
【主权项】：
1.一种快速构建丝状真菌表达载体的方法，其特征在于，将细菌质粒复制模块、酵母质粒复制模块、丝状真菌复制模块及表达模块共转化入酵母细胞，使其组装成一个完整的丝状真菌表达载体，将组装正确的质粒提取后转化丝状真菌，检测目标基因的表达情况。
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- 2018-11-13 - 2019-02-01 - C12N15/66
- 本发明公开一种避孕的工程菌株栓塞和胶囊的制备方法，其特征是利用减毒鼠伤寒沙门氏菌胞内侵袭的特性，携带人源毒素DNase I达到杀伤精子的作用。其特点通过与精子细胞结合，减弱精子的活力甚至将精子细胞杀死，实现避孕的作用，制剂形式为阴道栓塞，制作简单，使用方便，成本较低。
- 一种快速定位蛋白质在植物叶片保卫细胞中位置的方法-201811178109.9
- 荆艳萍;卜芋芬;潘成;隋鑫;张越 - 北京林业大学
- 2018-10-10 - 2019-01-25 - C12N15/66
- 一种快速定位蛋白质在植物叶片保卫细胞中位置的方法，本发明属于蛋白质在植物细胞中的定位方法领域，具体涉及蛋白质在植物保卫细胞中的定位方法领域。本发明的目的是为了解决传统方法进行蛋白质亚细胞定位的周期较长、操作复杂等问题。本发明的快速定位蛋白质在植物叶片保卫细胞中位置的方法为：一、植物表达载体的构建，二、植物叶片保卫细胞的分离，三、保卫细胞的转化，四、保卫细胞孵育培养，五、保卫细胞中蛋白质的定位。本发明提供的方法用于蛋白质在植物保卫细胞中的定位。
- 利用dI碱基进行基因克隆与点突变的方法-201811225899.1
- 袁慧;田文奇 - 苏州博睐恒生物科技有限公司
- 2018-10-21 - 2019-01-25 - C12N15/66
- 本发明公开了一种利用dI碱基进行基因克隆与点突变的方法，利用dI修饰引物，扩增载体与目标基因，然后将载体与目标基因片段用内切核酸酶V或DNA糖苷酶AlkA进行消化处理，在dI碱基处断裂DNA链，使载体与目标基因的末端分别形成带单链DNA尾巴的结构，二者的单链DNA彼此配对形成带缺口的环状重组DNA分子，载体和目标基因之间的配对区长达10‑15个碱基，不再需要DNA连接酶对DNA进行连接缝合，极大地增加了一次克隆反应中可以同时的目标基因数量，非常适合于高通量基因克隆。
- 专利分类
