[发明专利]一种外周血免疫细胞的静置分离方法在审
| 申请号： | 201910459848.3 | 申请日： | 2019-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN110144323A | 公开（公告）日： | 2019-08-20 |
| 发明（设计）人： | 丁海雷;成玉萍;莫伟;吕晓龙 | 申请（专利权）人： | 江苏省北科生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078 |
| 代理公司： | 北京中政联科专利代理事务所(普通合伙) 11489 | 代理人： | 何浩 |
| 地址： | 225300 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提出了一种人外周血免疫细胞的分离方法，本方法采用无菌容器静置的方式使外周血中免疫细胞实现分离，无菌容器静置法采用无菌容器静置的方式减少了离心作用对细胞的损伤，保证细胞的活率；同时静置分离法中添加羟乙基淀粉还能显著提高免疫细胞的回收率。 | ||
| 搜索关键词： | 免疫细胞 无菌容器 静置分离 外周血 羟乙基淀粉 细胞 离心作用 人外周血 回收率 损伤 保证 | ||
【主权项】：
1.一种外周血免疫细胞的静置分离方法，其特征为，包括以下步骤：1)将外周血样本转移至无菌细胞培养瓶中，混匀后，取0.5ml全血进行细胞计数；2)将羟乙基淀粉加入到细胞培养瓶中，使羟乙基淀粉和外周血样本充分混匀；3)混匀后将细胞培养瓶的盖子盖上，放在无菌操作台中进行静置，标记开始静置时间；4)当分离上清液与沉淀的刻度达到1：1时，用移液管将富含PBMCs的血浆的分离上清液转移至新的离心管中，标记静置时间及上清体积；5)混匀离心管中的分离上清液，取0.5ml计细胞数量及活率，将其余分离上清液经室温离心400g，10min；6)离心后，将离心上清液转移至50ml离心管中留存，取16ml分别进行需氧菌和厌氧菌检测；离心管中剩余的免疫细胞根据计数结果加入冻存液，调整密度至0.5×107/ml～4×107/ml，混匀后进行冻存。
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