[发明专利]一种用于毕赤酵母表达宿主的多基因敲入方法有效
| 申请号： | 201910403132.1 | 申请日： | 2019-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN110079546B | 公开（公告）日： | 2022-10-11 |
| 发明（设计）人： | 蔡孟浩;刘启;师晓娜;张元兴 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/66;C12N1/19;C12N15/10;C12R1/84 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 陈静 |
| 地址： | 200237 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种用于毕赤酵母表达宿主的多基因敲入方法。针对毕赤酵母缺乏高效的靶向性敲入技术的问题，本发明提供了合适的gRNA靶点。应用本发明的方法进行基因组改造后的毕赤酵母，其生长代谢不受影响。所述方法能够高效地实现多个基因的快速敲入，且可以进行筛选标记的回收，为毕赤酵母异源合成天然产物提供强有力的工具。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 酵母 表达 宿主 多基因 方法 | ||
【主权项】：
1.一种对毕赤酵母的基因组进行定向基因敲入方法，其特征在于，所述方法包括：(1)提供毕赤酵母，该毕赤酵母中KU70功能被下调或缺失；(2)将一个或多个gRNA表达盒、与之相应的一个或多个供体构建物引入(1)的毕赤酵母中，同时还引入Cas9表达盒；其中，所述gRNA靶向于gRNA靶点，所述gRNA靶点位于毕赤酵母基因组的基因启动子的上游100bp以内或者终止子的下游100bp以内；其中，所述供体构建物包含操作性连接的：5’同源臂、外源的基因操作序列、3’同源臂；(3)培养(2)的毕赤酵母，其基因组中发生一个或多个位置上的基因敲入。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于华东理工大学，未经华东理工大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910403132.1/，转载请声明来源钻瓜专利网。
