[发明专利]一种外源基因的检测方法与试剂盒在审
| 申请号： | 201910320127.4 | 申请日： | 2019-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN110172504A | 公开（公告）日： | 2019-08-27 |
| 发明（设计）人： | 彭海 | 申请（专利权）人： | 武汉明了生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 南京中高专利代理有限公司 32333 | 代理人： | 祝进 |
| 地址： | 430223 湖北省武汉市东湖新技术开发区光*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种外源基因的检测方法与试剂盒，属于生物检测领域。所述检测方法包括：确定待测样品中需要检测的外源基因和待测样品中的内源标准基因；根据外源基因的人工序列、外源基因的边界序列或内源标准基因的序列制备杂交探针；提取并纯化待测样品的基因组DNA和质控样品的基因组DNA并分别进行片段化；在待测样品DNA片段和质控样品DNA片段上分别连接上接头序列；利用模板片段和外源基因的特征片段对待测样品中的外源基因进行检测，判定外源基因是否存在于待测样品中。该方法能够避免因微生物感染、气溶胶污染造成的假阳性结果，还能够避免因PCR扩增效率等因素导致的定量不准确的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 外源基因 待测样品 检测 种外源基因 基因组DNA 标准基因 质控样品 试剂盒 内源 生物检测领域 制备杂交探针 假阳性结果 气溶胶污染 微生物感染 边界序列 模板片段 人工序列 特征片段 片段化 上接头 判定 | ||
【主权项】：
1.一种外源基因的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：确定待测样品中需要检测的外源基因和所述待测样品中的内源标准基因；根据所述外源基因的人工序列、所述外源基因的边界序列或所述内源标准基因的序列制备杂交探针；提取并纯化所述待测样品的基因组DNA和质控样品的基因组DNA；将所述待测样品的基因组DNA和所述质控样品的基因组DNA均片段化，获得待测样品DNA片段和质控样品DNA片段；在所述待测样品DNA片段和所述质控样品DNA片段上分别连接上接头序列，获得带有所述接头序列的所述待测样品DNA片段和带有所述接头序列的质控样品DNA片段；采用聚合酶链式反应扩增所述带有接头序列的所述待测样品DNA片段和所述带有接头序列的质控样品DNA片段，获得第一扩增产物；利用所述杂交探针富集所述第一扩增产物，获得富集产物；采用PCR扩增所述富集产物，获得第二扩增产物；纯化所述第二扩增产物，获得测序文库；对所述测序文库进行高通量测序，获得高通量测序数据；对所述高通量测序数据进行质量控制，获得合格的测序数据；根据所述合格的测序数据获得模板片段和所述外源基因的特征片段；利用所述模板片段和所述特征片段对所述待测样品中的所述外源基因进行检测，判定所述外源基因是否存在于所述待测样品中。
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