[发明专利]一种基于信号增强型多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶的玉米赤霉烯酮检测方法

摘要

本发明公开一种基于信号增强型多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶的玉米赤霉烯酮检测方法。二苯基丙氨酸（FF）可自组装形成二肽，将FF与介孔二氧化硅(MPS)复合，形成介孔二氧化硅纳米球与二肽复合物用于传感平台的构筑，通过二肽与抗体之间的共价结合，作为基底固载抗体。半胱胺敏化的金红石相二氧化钛介观晶体(rTiO2 MCs)可显著增强光电化学响应，将含有大量抗体的Envision多聚体与rTiO2 MCs复合，形成Envision@rTiO2 MCs复合物作为二抗通过夹心型免疫反应识别玉米赤霉烯酮(ZEN)，且多聚体功能化的金红石二氧化钛介晶可作为光电化学探针，随着玉米赤霉酮浓度的不断升高，光电信号不断增强。因此可实现对玉米赤霉烯酮浓度在10‑7‑10 ng/mL范围内的高灵敏检测。

主权项

1.一种基于信号增强型多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶的玉米赤霉烯酮检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1） 玻碳电极（GCE）的预处理：玻碳电极首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；（2） MPS‑FF/Ab₁/ZEN/Envision@rTiO₂ MCs修饰电极的制备：将5 mg的二苯基丙氨酸( FF)粉末溶于1 mL六氟异丙醇（HFIP）溶液，再将3 mg/mL介孔二氧化硅(MPS)溶液滴加到上述FF溶液中，使二者的浓度比为4:1得到混合溶液，然后，取3μL混合溶液滴涂于干净的玻碳电极表面，在烘箱中烘干，冷却至室温，将所获得的修饰电极浸泡于1 mg/mL 的玉米赤霉烯酮抗体(Ab₁)水溶液， 在4°C下孵育50 min，随后使用pH7.5的磷酸缓冲溶液去除多余的玉米赤霉烯酮抗体Ab_1，再将电极浸入浓度为1.0 wt.%的BSA 1 h，封闭电极表面上非特异性活性位点，冲去表面残余液后，即得到MPS‑FF/Ab₁修饰电极；将电极浸入5 μL不同浓度的玉米赤霉烯酮（ZEN）标准溶液中于冰箱中孵育40min；用pH 7.5的磷酸缓冲溶液冲洗电极表面并在室温条件下自然晾干，得到MPS‑FF/Ab₁/ZEN修饰电极;最后浸入5 μL Envision@rTiO₂ MCs溶液中，于4°C下孵育50min，用pH7.5的磷酸缓冲溶液洗去残余液即得到MPS‑FF/Ab₁/ZEN/Envision@rTiO₂ MCs;（3）玉米赤霉烯酮的检测：采用三电极体系进行测定，以MPS‑FF/Ab₁/ZEN/Envision@rTiO₂ MCs修饰电极为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂丝电极为辅助电极，利用光电化学工作站进行检测，设置电压为0.2V，每隔10s进行开关灯，氙灯发射的单色光激发光源使用前由单色仪过滤；在pH 7.5的 PBS缓冲溶液中，通过光电化学工作站进行检测1×10^‑7 ng/mL–10 ng/mL之间的一系列不同浓度的玉米赤霉烯酮标准溶液，通过记录开关灯前后产生的不同电流信号，绘制工作曲线；待测样品溶液代替玉米赤霉烯酮标准溶液进行检测，检测的结果通过工作曲线查得。