[发明专利]一种在毕赤酵母系统中表达重组人源脯氨酰-4-羟化酶的方法及应用在审
| 申请号： | 201910241421.6 | 申请日： | 2019-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN110172470A | 公开（公告）日： | 2019-08-27 |
| 发明（设计）人： | 项琪;黄亚东;肖巧学;肖雪 | 申请（专利权）人： | 广州暨南大学医药生物技术研究开发中心;广州市暨源生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N9/02;C12P13/24;C12R1/84 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 吴小明 |
| 地址： | 510632 广东省广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种在毕赤酵母系统中表达重组人源脯氨酰‑4‑羟化酶(rhP4H)的方法，具体包括重组质粒pPICZαA‑P4Hα2和pHIL‑PDI的构建，P4Hα2和PDI共表达毕赤酵母工程菌GS115的转化和阳性表达菌的筛选，并对表达条件进行优化。所得到的rhP4H酶，无论是在酵母体系内还是分离提纯后均能特异性催化人源胶原蛋白结构单元‑Gly‑X‑Y‑中脯氨酸的羟基化。 | ||
| 搜索关键词： | 人源 毕赤酵母 羟化酶 脯氨 毕赤酵母工程菌 特异性催化 表达条件 分离提纯 胶原蛋白 酵母体系 阳性表达 重组质粒 脯氨酸 共表达 羟基化 构建 筛选 转化 应用 优化 | ||
【主权项】：
1.一种在毕赤酵母中表达重组人源脯氨酰‑4‑羟化酶(rhP4H)的方法，包括以下步骤：(1)构建分别表达所述脯氨酰‑4‑羟化酶的α亚基(P4Hα2)和β亚基(PDI)的重组表达质粒，并将其共同导入毕赤酵母菌株中；和(2)通过抗生素抗性筛选和诱导培养，从毕赤酵母细胞中和/或培养物上清中获得所述重组人源脯氨酰‑4‑羟化酶。
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