[发明专利]一种连续收获腺相关病毒的生产工艺在审

专利信息
申请号: 201910093614.1 申请日: 2019-01-30
公开(公告)号: CN109666696A 公开(公告)日: 2019-04-23
发明(设计)人: 李华鹏;李祖成;丁志强;张冉;王桃希 申请(专利权)人: 广州派真生物技术有限公司
主分类号: C12N15/864 分类号: C12N15/864;C12N7/00;C12R1/93
代理公司: 广州胜沃园专利代理有限公司 44416 代理人: 张帅
地址: 510000 广东省广州市高新技术产业*** 国省代码: 广东;44
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摘要: 发明属于细胞工程领域,具体涉及一种连续收获腺相关病毒的生产工艺。本发明提供的连续收获腺相关病毒的生产工艺包括将细胞并用含牛血清及杀菌剂的营养液进行培养,收获悬浮细胞,接入含葡萄糖溶液及改性皂苷的平皿继续培养,然后收获含贴壁细胞的培养液,依次用无血清或含血清,同时含有葡萄糖溶液及改性皂苷的培养液培养,加入转染混合液培养,即得。通过收获上清中腺相关病毒液后补加营养液继续培养,可以实现连续收获3次病毒液。本发明提供的连续收获腺相关病毒的生产工艺,制备方法简单,大大节约了人力物力,同时实现了腺相关病毒的大规模生产,而且,本发明提供的这种生产工艺,适用于1~9血清型的病毒,适用范围极为广泛。
搜索关键词: 腺相关病毒 收获 生产工艺 葡萄糖溶液 营养液 改性 皂苷 培养液 培养液培养 人力物力 贴壁细胞 细胞工程 悬浮细胞 病毒液 混合液 牛血清 杀菌剂 无血清 血清型 血清 补加 平皿 转染 制备 病毒 并用 细胞 节约
【主权项】:
1.一种连续收获腺相关病毒的生产工艺,其特征在于,包括如下步骤:S1、细胞培养:将细胞复苏至T75放瓶中,使用含8%~10%牛血清及0.5~1.5g杀菌剂的营养液培养3代后,收获细胞状态较好的293T悬浮细胞,接种入10~15cm的含葡萄糖溶液及改性皂苷的平皿进行培养,达到规定的细胞培养参数后,放入培养箱,设置好CO2培养箱的培养参数,培养20‑28h,细胞汇合率达到80%~90%,得含贴壁细胞的混合液;S2、将腺相关病毒三质粒转染入293T细胞:去掉步骤S1所得含贴壁细胞的混合液中的上清液,贴壁缓慢加入15~25mL含牛血清,葡萄糖溶液及改性皂苷的DMEM培养液,然后混匀,逐滴加入含腺相关病毒的转染混合液,轻轻摇晃混匀,得转染混悬液;S3、293T细胞的孵育培养:将步骤S2所得转染混悬液放在CO2培养箱中,培养20~28h,弃掉上清液,加入无血清但是含有葡萄糖溶液及改性皂苷的DMEM培养液,进行孵育培养20~28h,得含腺相关病毒的混合液;S4、腺相关病毒液的收集:收获步骤S3所得含腺相关病毒的混合液的上清液,加入15~25mL无血清但是含有葡萄糖溶液及改性皂苷的DMEM培养液,孵育培养20~28h,收获上清液,重复上述操作,连续收获3次,最后一次连细胞一起收获,混合3次收获的病毒液,得混合病毒液;S5、将步骤S4所得混合病毒液经纯化后,进行分装,于‑80℃的温度下保存,即得。
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