[发明专利]一种提高重组人白介素-2（rhIL-2）产率的方法

摘要

本发明公开了一种提高重组人白介素‑2(rhIL‑2)产率的方法，包括纯化、纯化后洗脱液回收、用二巯基乙醇将rhIL‑2二聚体和错配体还原、重新氧化复性和纯化等步骤；本发明用二巯基乙醇将rhIL‑2二聚体和错配体还原，打开二硫键，重新氧化复性及纯化，使之能够形成具有生物活性的正确配对的二硫键，得到具有生物活性的rhIL‑2，使产率提高了20％左右。

主权项

1.一种提高重组人白介素‑2(rhIL‑2)产率的方法，其特征在于：包括如下步骤：(a)将纯化前的含重组人白介素‑2(rhIL‑2)及其二聚体或配错体的混合物经常规反相高效液相色谱(HPLC)纯化后得到第一组份的重组人白介素‑2(rhIL‑2)产物，产率为45‑46％；(b)将上述通过反相高效液相色谱(HPLC)洗脱后的重组人白介素‑2(rhIL‑2)二聚体和配错体混合物35‑45℃旋转蒸发出去洗脱剂得到第一混合物；(c)使用PBS缓冲液和SDS缓冲液将步骤(b)中的第一混合物稀释成含40‑60mmol/L PBS和质量分数0.5‑1.5％SDS的第二混合物，室温放置2‑3小时；(d)检测所述第二混合物的蛋白浓度，将所述第二混合物的蛋白浓度调节为1.5‑2mg/mL得到第三混合物；(e)向所述第三混合物内加入二巯基乙醇，使二巯基乙醇的浓度达到4‑6mmol/L，放入50‑70℃水浴中加热5‑15分钟得到第四混合物；(f)将所述第四混合物加入G‑25柱，用G‑25缓冲液洗脱、收集第一粗产物；(g)检测所述第一粗产物的蛋白浓度，使用G‑25缓冲液将所述第一粗产物的蛋白浓度调节为0.4‑0.8mg/mL得到第五混合物；(h)向所述第五混合物内加入所述第五混合物体积分数0.5‑1.5‰的浓度为50mmol/L的CuSO4，20‑40℃下氧化复性0.5‑1.5小时，反应完成后用浓度为10mmol/L的EDTA终止反应，得到第六混合物；(i)将所述第六混合物用质量分数为0.05‑0.15％的三氟乙酸(TFA)酸化后通过反相高效液相色谱(HPLC)洗脱，使用含有质量分数为0.05‑0.15％的三氟乙酸(TFA)的乙腈水溶液作为洗脱剂，收集第二产物；(j)将所述第二产物在35‑45℃旋转蒸发出去乙腈得到第二组份的重组人白介素‑2(rhIL‑2)产物，产率为19‑20％；(k)将所述第一组份的重组人白介素‑2(rhIL‑2)产物和第二组份的重组人白介素‑2(rhIL‑2)产物混合即得到最终的重组人白介素‑2(rhIL‑2)产物，总产率为64‑66％。