[发明专利]将衔接子附接至样品核酸的方法在审
| 申请号： | 201880025117.1 | 申请日： | 2018-04-13 |
| 公开（公告）号： | CN110546272A | 公开（公告）日： | 2019-12-06 |
| 发明（设计）人： | 安德鲁·肯尼迪;斯特凡尼·安·沃德·莫蒂默 | 申请（专利权）人： | 夸登特健康公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 11262 北京安信方达知识产权代理有限公司 | 代理人： | 李敏春;郑霞<国际申请>=PCT/US2 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 公开了制备具有单链突出端的双链核酸以便扩增和测序的方法。使平端双链核酸分子与Taq接触导致单核苷酸向核酸的3'末端的非模板指导的添加，其中A被最频繁地添加A，随后是G，随后是C和T。G加尾频繁得足以使得核酸分子与衔接子的连接效率可以通过包括用T和C加尾的衔接子而显著增加。用平端衔接子连接未成功进行加尾的平端核酸分子，连接效率可以甚至进一步增加。 | ||
| 搜索关键词： | 衔接子 平端 核酸分子 连接效率 双链核酸分子 单核苷酸 模板指导 双链核酸 测序 单链 核酸 扩增 制备 成功 | ||
【主权项】：
1.一种制备用于分析的核酸的方法，所述方法包括：/n(a)通过提供5'-3'聚合酶活性和3'-5'校正活性的一种或更多种酶以及四种标准类型核苷酸的作用，使样品中具有单链突出端的双链核酸平端化，其中伴随在5'末端的单链突出端用作通过所述聚合酶活性延伸互补链的模板，并且伴随在3'末端的单链突出端被产生平端核酸的所述校正活性消化；/n(b)在不将所述平端核酸与所述样品的其他组分分离的情况下，通过无3'-5'校正功能的聚合酶的作用对所述平端核酸进行末端加尾，所述无3'-5'校正功能的聚合酶进行核苷酸向所述平端核酸的3'末端的非模板指导的添加，其中A优先于G被添加，G优先于C或T被添加；/n(c)使来自步骤(c)的核酸与在3'末端具有单核苷酸T或C突出端的至少部分双链的衔接子退火；以及/n(d)将所述核酸连接至所述衔接子。/n
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