[发明专利]高油酸花生快速选种试剂盒

摘要

本发明提供一种高油酸花生快速选种试剂盒，研究表明脂肪酸脱氢酶基因(FAD2)是控制花生油酸性状的关键基因。FAD2由位于不同基因组上的两个非等位基因FAD2A和FAD2B共同编码，本发明根据这一遗传基因为基础，以胶体金试纸条为载体，按照花生高油酸突变基因中的基因序列的保守区，分别设计针对野生及突变的FAD2A基因和FAD2B基因标记的多重扩增引物，优化引物组合与反应体系；利用核酸杂交的原理，将带有标记的扩增产物与胶体金试纸条上特异性抗体进行结合，建立了检测FAD2A基因和FAD2B基因的PCR扩增与胶体金免疫侧流层析杂交技术试剂盒；操作简便，特异性强且检测灵敏度高。

主权项

1.一种高油酸花生快速选种试剂盒，其特征在于，所述高油酸花生快速选种试剂盒包括：有高油酸花生FAD2A突变基因型引物对，高油酸花生FAD2B突变基因型引物对，花生FAD2A野生基因型引物对，花生FAD2B野生基因型引物对，TaqDNA聚合酶、无菌去离子水、阴性标准品、核酸免疫胶体金试纸条；所述FAD2A突变基因型引物对，包括突变型FAD2A基因序列的正向引物FAD2A‑A，引物5’端用FAM标记，正向引物序列为FAD2A‑A：5’‑FAM‑GTTTTGGGACAACACTTCTTT‑3’，反向引物FAD2‑R，引物5’端用生物素标记(biotin)，反向引物序列为FAD2‑R：5’‑biotin‑CTCTGACTATGCATCAGAACTTGT‑3’，所述产物长度为557bp；所述FAD2B突变基因型引物对，包括突变型FAD2B基因序列的正向引物FAD2B‑A，引物5’端用VIC标记，正向引物序列为FAD2B‑A：5’‑VIC‑AACACTTGGYCGCGGTTT‑3’，反向引物FAD2‑R，引物5’端用生物素标记(biotin)，反向引物序列为FAD2‑R：5’‑biotin‑CTCTGACTATGCATCAGAACTTGT‑3’，所述产物长度为539bp；所述FAD2A野生基因型引物对，包括野生型FAD2A基因序列的正向引物FAD2A‑F，引物5’端用异硫氰酸荧光素标记(fluorescein isothiocyanate，FITC)，正向引物序列为FAD2A‑F：5’‑FITC‑GATTACTGATTATTGACTTGCTTTG‑3’，反向引物FAD2‑R，引物5’端用生物素标记(biotin)，反向引物序列为FAD2‑R：5’‑biotin‑CTCTGACTATGCATCAGAACTTGT‑3’，所述产物长度为1200bp；所述FAD2B野生基因型引物对，包括野生型FAD2B基因序列的正向引物FAD2B‑F，引物5’端用地高辛标记(digoxin)，正向引物序列为FAD2B‑F：5’‑digoxin‑CAGAACCATTAGCTTTGTAGTAGTG‑3’，反向引物FAD2‑R，引物5’端用生物素标记(biotin)，反向引物序列为FAD2‑R：5’‑biotin‑CTCTGACTATGCATCAGAACTTGT‑3’，所述产物长度为1241bp。