[发明专利]一种用于检测独特双端文库标签组合的质控方法及应用

摘要

本发明公开了提供一种用于检测独特双端文库标签组合的质控方法及应用，属于生物检测技术领域，该质控方法包括以下步骤：S1)构建带有独特双端文库标签组合的gDNA文库，将构建好的文库进行上机测序，并读取文库标签序列，S2)对文库标签序列进行第一次质控分析，S3)根据S2的分析结果，在有需要的情况下，替换有问题的标签原料，按照步骤S1)方法，重新构建带有独特双端文库标签组合的gDNA文库，将构建好的文库进行上机测序，并读取文库标签序列，S4)对文库标签序列进行第二次质控分析，根据结果判断是否继续根据S3)方法替换有问题文库标签，直至所有文库标签符合质控分析的指标。本发明质控方法能提高文库标签的检测效率，更适合文库准确测序的需求。

主权项

1.一种用于检测独特双端文库标签组合的质控方法，其特征在于，包括以下步骤：S1)以文库标签标准品与gDNA标准品为原料，构建带有独特双端文库标签组合的gDNA文库，将构建好的文库进行上机测序，并读取文库标签序列；S2)对文库标签序列进行第一次质控分析，质控分析的指标包括以下几项：最大的单侧标签污染占比≤2.5％，最大的标签组合污染占比≤0.01％，每组标签样本序列条数≥5000条，所有标签组合混合占比方差系数≤0.5，综合序列通过率≥97％，每组标签样本序列占比≥0.2/文库标签组合对数，单侧大于1％污染的标签占比应≤10％；S3)若步骤S2)质控分析显示指标不符合，则重新合成不符合质控要求的文库标签；按照步骤S1)方法，以重新合成的文库标签、第一次质控分析符合要求的文库标签和gDNA为原料，构建带有独特双端文库标签组合的gDNA文库，将构建好的文库重新进行上机测序，并读取文库标签序列；S4)对文库标签序列进行第二次质控分析，直至所有文库标签符合质控分析的指标；在质控分析的参数中，所述独特双端文库标签组合均由上游文库标签和下游文库标签组成，所述上游文库标签统称为IG5，IG5包含为A和B；所述下游文库标签统称为IG7，IG7包含a和b；匹配且正确的独特双端文库标签组合为A‑a以及B‑b；不匹配的独特双端文库标签组合为A‑b，以及B‑a；每个测序反应后通过分析可以得到以上组合各自的序列条数；所述单侧标签污染占比为组内标签之间发生的交叉污染比例，且污染只可能发生在组内，即IG5组内或/和IG7组内发生污染；当IG7的a在生产过程中未发生任何交叉污染，对IG5的A而言，其中含有B的污染占比＝含有B‑a的序列条数/所有含有a的序列条数，当IG5的A在生产过程中未发生任何交叉污染，对IG7的a而言，其中含有b的污染占比＝含有A‑b序列条数/所有含有A的序列条数；当B污染A且b污染a，则B‑b标签组合污染占比＝(含有B‑a的序列条数/所有含有a的序列条数)×(含有A‑b序列条数/所有含有A的序列条数)；当IG7的b在生产过程中未发生任何交叉污染，对IG5的B而言，其中含有A的污染占比＝含有A‑b的序列条数/所有含有b的序列条数，当IG5的B在生产过程中未发生任何交叉污染，对IG7的b而言，其中含有a的污染占比＝含有B‑a序列条数/所有含有B的序列条数；当A污染B且a污染b，则A‑a标签组合污染占比＝(含有A‑b的序列条数/所有含有b的序列条数)×(含有B‑a序列条数/所有含有B的序列条数)；所述每组标签样本序列条数为通过系统过滤后的每组正确配对序列条数，即含有A‑a的序列条数或含有B‑b的序列条数；所述所有标签组合混合占比方差系数为通过系统过滤后的每组正确配对序列条数在通过系统过滤后的总配对正确序列条数中比例的方差系数；所述综合序列通过率为测序反应后通过系统过滤后的正确配对且有效序列的总条数占通过系统过滤后所有序列总条数的比例；所述每组标签样本序列占比为通过系统过滤后的每组正确配对的序列条数占通过系统过滤后总序列的比例；所述单侧大于1％污染的标签占比为：上游文库标签内，污染比例大于1％的文库标签数占总文库标签数的比例；以及，下游文库标签内，污染比例大于1％文库标签数占总文库标签数的比例。