[发明专利]一种微量蛋白质样品浓缩的方法在审
| 申请号： | 201811315445.3 | 申请日： | 2018-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN109438551A | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 陆天聪 | 申请（专利权）人： | 北京蛋白世界生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/113 | 分类号： | C07K1/113;C07K1/34;C12P21/06 |
| 代理公司： | 北京联瑞联丰知识产权代理事务所(普通合伙) 11411 | 代理人： | 苏友娟 |
| 地址： | 100020 北京市朝阳区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种微量蛋白质样品浓缩的方法，在生物微量蛋白样品中加入Laemmli加样缓冲液和二硫苏糖醇进行加热变性，能够使得生物微量蛋白样品中的二硫键还原，打开了蛋白结构。然后将尿素加入样品中，再将样品混合物加入超滤管中，超滤浓缩，并将浓缩处理的蛋白样品SDS‑PAGE电泳、胶内酶解，即得质谱样品，再将质谱样品进行质谱鉴定分析。本发明能够对超低浓度蛋白样品进行检测，不受样品的体积或蛋白质浓度的限制，整个处理操作流程方便简洁，样品损失少、蛋白产物得率高、显著提高质谱对微量蛋白和多肽的鉴定率。 | ||
| 搜索关键词： | 微量蛋白样品 微量蛋白质 样品浓缩 质谱样品 二硫苏糖醇 加样缓冲液 样品混合物 超滤浓缩 处理操作 蛋白产物 蛋白结构 蛋白样品 加热变性 浓度蛋白 浓缩处理 微量蛋白 样品损失 质谱鉴定 超滤管 二硫键 得率 多肽 酶解 质谱 尿素 蛋白质 还原 检测 分析 | ||
【主权项】：
1.一种微量蛋白质样品浓缩的方法，其特征在于，包括以下步骤：a)向生物微量蛋白样品中Laemmli加样缓冲液和二硫苏糖醇，在90～100℃下反应5min；b)将加入步骤a)得到的混合物冷却至室温后加入尿素粉末，溶解；c)将步骤b)得到的溶解物离心浓缩，并用尿素进行冲洗，得到浓缩物；d)将步骤c)得到的浓缩物进行SDS‑PAGE电泳，得到蛋白质凝胶；e)将步骤d)得到的蛋白质凝胶进行胶内酶解，得到质谱样品；f)将步骤e)得到的质谱样品进行质谱分析，并通过数据库检索得到生物样品的多肽以及蛋白鉴定信息。
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