[发明专利]一种水牛睾丸精子细胞分离和鉴定方法在审
| 申请号： | 201811103634.4 | 申请日： | 2018-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN109182254A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 张明;张鹏飞;黄愉淋;侯振 | 申请（专利权）人： | 广西大学 |
| 主分类号： | C12N5/076 | 分类号： | C12N5/076;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 北京华仁联合知识产权代理有限公司 11588 | 代理人： | 苏雪雪 |
| 地址： | 530000 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明属于精子细胞处理技术领域，具体涉及一种水牛睾丸精子细胞分离和鉴定方法，其主要包括以下步骤：1)获得水牛睾丸，用胶原酶IV、透明质酸酶和DNase I组合酶法消化，细胞筛过滤，差异贴壁后取悬浮细胞；2)取悬浮细胞进行活细胞染色；3)流式细胞仪分选。有益效果：本技术方案为行之有效的水牛精子细胞分离方法，通过使用双酶法分解牛睾丸组织，得到单细胞悬液，采用连续差异贴壁法去除体细胞的干扰，再采用流式细胞仪根据未贴壁细胞染色后的荧光强弱，判断细胞DNA含量，有效消化和去除了二倍体精原细胞和四倍体初级经母细胞等其他非目标细胞的干扰，实现大量单倍体精子细胞的成功分选。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞分离 水牛 流式细胞仪 悬浮细胞 睾丸精子 分选 贴壁 单倍体精子细胞 单细胞悬液 活细胞染色 透明质酸酶 未贴壁细胞 胶原酶IV 精原细胞 精子细胞 连续差异 目标细胞 水牛精子 荧光强弱 有效消化 睾丸组织 细胞DNA 二倍体 母细胞 双酶法 四倍体 体细胞 细胞筛 组合酶 染色 睾丸 去除 过滤 分解 消化 成功 | ||
【主权项】：
1.一种水牛睾丸精子细胞分离和鉴定方法，其特征在于包括以下步骤：1)获得水牛睾丸，用胶原酶IV、透明质酸酶和DNase I消化，细胞筛过滤，差异贴壁后收集悬浮细胞；2)取悬浮细胞进行活细胞染色；3)采用流式细胞仪根据细胞形态和染色情况进行分选，获得水牛精子细胞；4)对获得水牛精子细胞进行鉴定。
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