[发明专利]一种有效表达色氨酸合成酶的新型表达载体及其应用

摘要

本发明公开了一种有效表达色氨酸合成酶的新型表达载体及其应用，其表达载体构建步骤为：一、以大肠杆菌K‑12为模板PCR扩增trpBA基因，纯化后连接到pCold I载体上，得到重组质粒trpBA‑pCold I，二、设计引物P_{敲除lacO‑F}/P_{敲除lacO‑R}，以trpBA‑pCold I质粒为模板进行全质粒PCR，产物经Dpn I处理后转化大肠杆菌，再进行质粒扩增、培养、测序，得到敲除lacO序列的新重组质粒，再对新重组质粒的cspA启动子进行随机突变并转化大肠杆菌经扩增、培养、测序、筛选得到有效表达色氨酸合成酶的新型表达载体。该方法能够避免化学诱导剂的使用，不需要调整发酵温度，从而有效降低色氨酸合成酶的生产成本，且为进一步研究启动子对基因表达的影响提供了理论基础。

主权项

1.一种有效表达色氨酸合成酶的新型表达载体，其特征在于所述表达载体是将原表达载体pCold I的lacO序列进行了敲除，并在此基础上对其启动子cspA进行了随机突变，筛选得到距cspA启动子5’端47位的T碱基发生缺失的优良突变体，新型表达载体的启动子及5`非翻译区的序列如SEQ ID NO.1所示。