[发明专利]一种分离大鼠脑微血管内皮细胞的方法在审
| 申请号： | 201810913798.7 | 申请日： | 2018-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN108913652A | 公开（公告）日： | 2018-11-30 |
| 发明（设计）人： | 赵成诚;黄祥宏;李娜 | 申请（专利权）人： | 武汉华联科生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京天盾知识产权代理有限公司 11421 | 代理人： | 杨本官 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市武昌区*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于细胞生物学领域，具体涉及一种分离大鼠脑微血管内皮细胞的方法。现阶段常采用大鼠大脑皮质直接进行原代分离，但由于鼠龄较大，细胞活力较弱，因此分离出来的细胞纯度相对较低，同时活力也相对较差。本发明针对上述问题，提供一种方法简单且细胞成活率高的分离大鼠脑微血管内皮细胞的方法。本发明提供的一种分离大鼠脑微血管内皮细胞的方法步骤简单，更方便于实际应用，且分离出的原代细胞活力强、纯度高以及存活率高。 | ||
| 搜索关键词： | 脑微血管内皮细胞 大鼠 细胞生物学领域 大鼠大脑皮质 细胞成活率 细胞纯度 细胞活力 原代分离 原代细胞 存活率 活力强 鼠龄 应用 | ||
【主权项】：
1.一种分离大鼠脑微血管内皮细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将孕19～22天的大鼠胎鼠的全脑去除小脑、间脑、软脑膜、脑膜大血管、大脑白质、残余大血管和软脑膜，之后将分离的大脑皮质放置DMEM培养基中；(2)将大脑皮质剪成约0.5～1.5mm3大小组织块，再加入等体积质量分数为0.2～0.3％的胰蛋白酶和0.15～0.25％的胶原酶，混匀，在36.5～37.5℃下消化120～180min，每隔5～15min摇晃一次，之后加入4～6ml的含8～12％FBS的DMEM培养基，悬浮混匀后2500～3500r/min离心15～25min，再去除中上层神经组织及大血管，保留底部沉淀；(3)加入1.5～2.5ml的0.05～0.15％胶原酶/分散酶悬浮混匀后在36.5～37.5℃的水浴消化0.5～1.5h，之后离心去上清，再加1.5～2.5ml的DMEM培养基悬浮后铺于经离心形成连续梯度的10～14ml的45～55％Percoll，离心后吸取红细胞层之上的纯化的微血管段，吸出后用DMEM培养基漂洗1～3次；(4)将收集的细胞用含8～12％FBS的DMEM培养基重悬，之后置于CO2培养箱培养，24h后换液，以后隔天换液。
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