[发明专利]一种淋巴细跑EB病毒核酸荧光定量PCR检测方法

摘要

本发明涉及一种淋巴细跑EB病毒核酸荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：取待检验组织组织，经过裂解、离心，将混合液体上层水相转移至一干净离心管中，加等体积异丙醇，混至均匀后，离心取管底部和侧壁上形成胶状沉淀块；加入无RNA酶的去离子水，即获得的RNA溶液；取RNA溶液，加入逆转录buffer、上下游引物、DEPC水、逆转录酶，得到的逆转录终溶液即为DNA溶液；将各反应管放入荧光定量PCR仪器中，设置标记荧光基团种类、样本名称及类型，按下列条件进行扩增。有益效果：样本在聚合酶的作用下对靶区域进行扩增，利用荧光探针技术实时监测扩增产物的累积；对扩增产物的检测判断EB病毒核酸的存在；具有特异、灵敏、快速、操作方便等优点。

主权项

1.一种淋巴细跑EB病毒核酸荧光定量PCR检测方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、样品RNA的抽提(1)预处理待检验组织；(2)孵育待检验组织，获得含RNA的胶状沉淀块；(3)制备RNA固体沉淀物；(4)取RNA固体沉淀物，加入40μl无RNA酶的去离子水，并采用枪吹打5～20次，使其完全溶解，即获得的RNA溶液，并保存于‑80℃待用。步骤二、样品DNA的合成(1)取2μl步骤(1)中获得RNA溶液，加入1.5μ～2μl逆转录buffer、0.2μl～0.5μl上游引物、0.2μl～0.5μl下游引物、5μ～10μl的DEPC水，轻摇溶液，并置于离心机中6000rpm短暂离心10S～30S；(2)混合液在60℃～70℃金属浴3min～5min，取出后立即冰水浴至室温，然后加入0.5μl～1μl逆转录酶，35℃～37℃水浴1h～1.5h；取出后立即70℃～95℃金属浴3min～5min，得到的逆转录终溶液即为DNA溶液，保存于‑80℃待用；步骤三、PCR扩增将各反应管放入荧光定量PCR仪器中，设置标记荧光基团种类、样本名称及类型，进行扩增；步骤四、分析判断：Ct值：低于35，表示为EB病毒感染阳性；Ct值：35～38之间，FAM通道有比较明显的S型扩增曲线则要对样品进行复检；Ct值：高于38，意味EB病毒载量低于检测下限。