[发明专利]基于T4 DNA聚合酶的西瓜花叶病毒检测传感器及其组装方法

摘要

本发明公开了一种基于T4 DNA聚合酶的西瓜花叶病毒检测传感器及其组装方法，所述传感器包括探针P1、探针P2、探针P3、发卡探针HP1、Nb.BbvC Ⅰ、T4 DNA聚合酶、dGTP、dNTP、发夹探针HP2、金电极；利用目标DNA和P1共同打开HP1，再利用Nb.BbvC Ⅰ识别位点，37℃酶切获得两个片段；加入P2与其中一个片段杂交，在T4 DNA聚合酶/dGTP作用下进行外切反应，加入dNTP进行聚合反应，再加入P3，使之与P2完全互补，即获得游离Mg2+‑依赖DNAzyme混合溶液；将其滴加到HP2修饰的金电极上反应，依次加入Hemin、K+、H2O2进行电流信号检测。本发明的测体系线性范围为50fM‑1nM，最低检测限为50fM，能够实现WMV的大田高灵敏快速检测。

主权项

1.一种基于T4 DNA聚合酶的西瓜花叶病毒检测传感器，其特征在于，包括：探针P1、探针P2、探针P3、发卡探针HP1、Nb.BbvCⅠ、T4 DNA聚合酶、dGTP、dNTP、发夹探针HP2、金电极；所述探针P1的基因序列如SEQ ID No.1所示：SEQ ID No.1：5′‑ACACACAGCGATCACCCATGCCTCAGCTTTT‑3′；所述探针P2的基因序列如SEQ ID No.2所示：SEQ ID No.2：5′‑GGGTTTAACATGGGTGATCGAAATAGTGGGTG‑3′；所述探针P3的基因序列如SEQ ID No.3所示：SEQ ID No.3：5′‑CACCCACTATTTCGATCACCCATGTTAAACCC‑3′；所述发卡探针HP1的基因序列如SEQ ID No.4所示：SEQ ID No.4：5′‑ATGCCTCAGATAAGCCACAAAAAAAAGCTGAGGCAT‑3′；所述发夹探针HP2的基因序列如SEQ ID No.5所示：SEQ ID No.5：5′‑SH5’‑SH‑(CH2)6‑TTTTGGGTTGGGCGGGATGGGTTTATrAGGTGTGTATCCCGCCC‑3′。