[发明专利]一种红曲霉株的培育方法

摘要

本发明公开一种红曲霉株的培育方法，首先进行红曲霉菌种培养，将红曲米和蒸馏水混合研磨并过滤制得菌悬液，将菌悬液接种到种子培养基中进行培养，得到红曲霉菌种；然后制备红曲霉菌种培养基，先将鱼粉、葛根粉、大豆粉、洛伐他汀、蒸馏水和氨水等制得发酵培养基，然后将发酵培养基的pH调节为3.5，再在其中加入诱导剂H‑Pen，制得培养基；再将红曲霉菌种接种培养基中培养，制得诱变红曲霉孢子菌孢子，对其进行冲洗，制得悬液，通过离心机离心，得到红曲霉孢子菌，最后将制得的红曲霉孢子菌进行提取、浓缩和干燥,提取莫纳克林；本发明通过红曲菌株自诱导的培育方法，可有效提高培养基中红曲菌株的产量，进而提高红曲菌株中莫纳克林K及抗癌成分产量。

主权项

1.一种红曲霉株的培育方法，其特征在于：包括以下步骤：S1：红曲霉菌种培养1)先将红曲米与蒸馏水按4‑5:1‑2的比例混合，并经过研磨机制得米浆，然后通过过滤器过滤得到菌悬液，备用；2)将步骤1)制得的菌悬液通过吸管接种到在灭菌后的种子培养基中，并在36‑38℃的摇床内培养8‑10天，得到红曲霉菌种，备用；S2：红曲霉菌种培养基的制备1)鱼粉10‑15份、麸皮3‑5份、复合氨基酸4‑6份、EM菌种7‑9份、磷酸氢二钾1‑3份、葛根粉5‑7份、大豆粉5‑7份和洛伐他汀1‑3份放入容器内，然后加入蒸馏水20‑30份、氨水20‑30份，在30‑40℃的条件下,使用搅拌棒以20‑30r/min的速度搅拌10‑15min，使各物料混合均匀，再通过高压蒸汽对其进行灭菌，制得发酵培养基，备用；2)在步骤1)得到发酵培养基中加入pH调节剂，调节发酵培养基的pH为3.5，备用；3)在pH为3.5的发酵培养基中加入诱导剂H‑Pen1‑1.5份，通过搅拌棒以30‑40r/min的速度搅拌40‑50min，制得培养基，备用；S3：诱变红曲霉孢子菌1)将S1中得到的红曲霉菌种接种到S2制得的培养基中，培养温度为30℃，培养时间为12‑15天，红曲霉菌通过发酵培养基及诱导剂H‑Pen的培养，制得诱变红曲霉孢子菌孢子，备用；2)取20‑30mL0.8％氯化钠无菌水对步骤1)制得诱变红曲霉孢子菌孢子进行冲洗，使得红曲霉孢子脱离培养基，制得红曲霉孢子菌悬液，备用；3)将步骤2)制得的红曲霉孢子菌悬液通过离心机，在2800‑3000r/min的转速下，离心15‑20min，得到红曲霉孢子菌，备用；S4：莫纳克林的提取1)将S3中制得的红曲霉孢子菌放入超声波提取机内，并加入乙醇10‑12份，提取2‑3次，然后进行过滤分离，得到滤液，再将滤液真空浓缩至原体积的1/2，并除去红曲色素，得到浓缩液，备用；2)将步骤1)制得的浓缩液在45‑50℃下真空浓缩至粉末状，得到粉末，然后将粉末放入干燥箱内，在30‑40℃的条件下干燥1‑2小时,即得莫纳克林。