[发明专利]一种农杆菌介导的高效光果甘草遗传转化方法

摘要

本发明属于甘草基因工程技术领域，具体涉及一种农杆菌介导的高效光果甘草遗传转化方法包括如下步骤：(1)将含有目的DNA的质粒导入农杆菌得到重组农杆菌；(2)培养重组农杆菌用作转化侵染液；(3)用侵染液浸泡光果甘草外植体；(4)将外植体放置于分化培养基共培养；(5)将共培养后的外植体转移至筛选及分化培养基上培养，并去除农杆菌；(6)以卡那霉素作为筛选压力，得到丛生芽；(7)将丛生芽接种至诱导生根培养基，即得到光果甘草抗性再生苗，抗性苗经PCR鉴定为阳性转基因苗。本发明所提供的光果甘草的遗传转化方法，操作简单易行，转化效率高，从转化起始至分化成苗、生根可以在55天内完成。本发明方法在光果甘草基因育种工程、细胞工程、代谢工程等领域具有广泛应用。

主权项

1.一种农杆菌介导的高效光果甘草遗传转化方法，包括如下步骤：(1)将含有目的DNA的质粒导入农杆菌得到重组农杆菌；将所述重组农杆菌在含有卡那霉素的LB液体培养基中于28℃振荡培养24‑36小时；(2)取所述步骤(1)的菌液于含有卡那霉素的LB液体培养基中，28℃振荡培养至OD600 值为0.6‑0.8，离心收集菌体；(3)用MS液体培养基重悬所述步骤(2)收集的菌体，28℃继续振荡培养至菌液OD600 值分别为0.6和0.7，用作侵染液；(4)用所述步骤(3)的侵染液震荡浸泡光果甘草外植体（下胚轴）15‑30分钟，得到侵染后的光果甘草下胚轴；(5)将所述步骤(4)得到的侵染后的光果甘草外植体放置MS诱导分化培养基于25 ℃黑暗中共培养2‑3天，得到共培养物；(6)将所述步骤(5)得到的共培养的甘草外植体接种于MS筛选及分化培养基上培养4‑5周，得到丛生芽；(7)将所述步骤(6)得到的丛生芽在生根诱导培养基上诱导生根，即得到光果甘草的抗性再生苗。