[发明专利]一种检测BRAFV600E基因突变的方法在审
| 申请号： | 201810336729.4 | 申请日： | 2018-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN108277260A | 公开（公告）日： | 2018-07-13 |
| 发明（设计）人： | 孟宪瑛;魏佳;王瑶琪;陈光;张强;孙旭;逄仁柱;杨帅;李勇;王培松 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6837 | 分类号： | C12Q1/6837 |
| 代理公司： | 长春众邦菁华知识产权代理有限公司 22214 | 代理人： | 李外 |
| 地址： | 130000 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 一种检测BRAFV600E基因突变的方法，属于生物技术领域。解决现有检测BRAFV600E基因突变的方法操作繁杂，无法确定突变碱基，难于微型化和高通量的问题。该方法采用DNA微阵列技术，固定基因探针，与突变基因片段杂交后形成二聚体，再以带有荧光染料CY5的DNA互补链为标记物，通过杂交反应标记生物芯片，结合微阵列荧光扫描仪，获得生物芯片上荧光染料的荧光信号，可实现对BRAFV600E基因突变的定向检测。本方法简便，灵敏度可达到0.1nM，可检测BRAFV600E基因单核苷酸突变，突变基因的检测限为：0.1nM，等位基因频率低至0.1％，检测范围为：3个数量级。 | ||
| 搜索关键词： | 基因突变 生物芯片 突变基因 荧光染料 种检测 检测 单核苷酸突变 等位基因频率 生物技术领域 微型化 荧光扫描仪 定向检测 个数量级 固定基因 突变碱基 荧光信号 杂交反应 灵敏度 标记物 二聚体 高通量 可检测 微阵列 探针 杂交 基因 | ||
【主权项】：
1.一种检测BRAFV600E基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：将两种BRAFV600E基因探针与点样液混合得到两种BRAFV600E基因探针点样溶液，然后在基片上进行点样，得到BRAFV600E捕获基因芯片；步骤二：将细胞或组织中提取的DNA进行两步不对称PCR反应，得到单链待检测目的基因；步骤三：将步骤一得到的BRAFV600E捕获基因芯片上的基因探针与步骤二得到的待检测基因的目的基因片段或纯突变型待检测目的基因片段进行杂交反应，得到基因探针‑目的基因二聚体生物芯片；步骤四：将步骤三得到的基因探针‑目的基因二聚体生物芯片与CY5标记的DNA互补链杂交溶液进行杂交反应，得到荧光标记的BRAFV600E生物芯片；步骤五：将步骤四得到的荧光标记的BRAFV600E生物芯片放入微阵列扫描仪中进行检测，得到BRAFV600E生物芯片的荧光检测信号，实现对BRAFV600E基因突变的检测。
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