[发明专利]一种致敏胶乳的制备方法及试剂盒

摘要

一种致敏胶乳的制备方法及试剂盒，属于医药试剂技术领域。本发明的目的是利用切向流过滤系统浓缩换液的方法制备致敏胶乳的方法及试剂盒。本发明步骤是：准备EDC溶液；得到活化的胶乳微球；将活化的胶乳微球与偶联缓冲液混合；将胶乳微球与抗体偶联；加入牛血清白蛋白母液；将溶液与储存缓冲液混合液进行过滤即得到致敏胶乳。本发明的有点是克服了因用离心机、细胞超声破碎仪导致的偶联效率低、试剂不稳定、出现黑色沉淀和空白吸光度大的缺陷，同时更利于批量生产。

主权项

1.一种致敏胶乳的制备方法，其特征在于：其步骤是：（1）准备：准备60‑300nm的聚苯乙烯胶乳微球，胶乳微球用pH6.0的50mM/L 2‑（N‑吗啡啉）乙磺酸稀释至终浓度为1‑3%w/v得到胶乳微球溶液；1‑乙基‑（3‑二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（EDC）用pH6.0的50mM/L 2‑（N‑吗啡啉）乙磺酸溶解，得到浓度为0.01g/mL的EDC溶液；（2）活化：以胶乳微球的重量为计，每mg微球按10‑100μL EDC溶液的比例滴加到胶乳微球溶液中，震荡混匀，10‑37℃震荡活化20‑30min，震荡速度为50‑200rpm/min，得到活化的胶乳微球；（3）换液：将活化的胶乳微球倒入切向流过滤系统的样品容器中，将偶联缓冲液倒入清洗液容器中，在仪器上设置目标泵速为30‑60mL/min、跨膜压力为2.5Psi、剪切力为2000‑4000s‑1，参数设置完成后按开始键进行过滤，偶联缓冲液的体积为待过滤胶乳微球体积的3‑6倍，按结束键停止过滤，整个过程控制在1h之内；（4）偶联：以胶乳微球的重量为计，按微球：抗体=0.1‑0.5%的比例将抗体加入到溶液（3）中，震荡混匀，10‑37℃震荡偶联2‑3h，震荡速度为50‑200rpm/min；（5）封闭：按溶液的终体积为0.5‑2%的比例将5%牛血清白蛋白母液加入到溶液（4）中，震荡混匀，10‑37℃震荡封闭1‑2h，震荡速度为50‑200rpm/min；（6）清洗换液：将溶液（5）倒入切向流过滤系统的样品容器中，将储存缓冲液倒入清洗液容器中，在仪器上设置目标泵速为30‑60mL/min、跨膜压力为2.5Psi、剪切力为2000‑4000s‑1，参数设置完成后按开始键进行过滤，储存液的体积为待过滤胶乳微球体积的3‑6倍，按结束键停止过滤，即得到致敏胶乳。