[发明专利]一种长江江豚环境DNA提取方法及其应用在审
| 申请号： | 201810233266.9 | 申请日： | 2018-03-21 |
| 公开（公告）号： | CN108624585A | 公开（公告）日： | 2018-10-09 |
| 发明（设计）人： | 唐永凯;吴昀晟;俞菊华;徐跑;刘凯;李建林;李红霞;于凡 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 余俊杰 |
| 地址： | 214081 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种长江江豚环境DNA提取方法及其应用，所述方法包括采集待鉴定区域的水样品，过滤处理，采用试剂盒提取DNA，进行real time PCR扩增，并根据溶解曲线的峰值确定鉴定区域是否有长江江豚生存。本发明所述方法具有效率高、特异性强、相关系数高、线性范围广等优点；本发明所述方法能够快速、准确鉴定调查水域是否存在长江江豚。 | ||
| 搜索关键词： | 长江 环境DNA 峰值确定 过滤处理 特异性强 提取DNA 试剂盒 水样品 应用 溶解 采集 水域 调查 | ||
【主权项】：
1.一种长江江豚环境DNA提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)在长江调查水域采集水样，采集设备每次使用前经过漂白粉溶液消毒，无菌水冲洗并干燥；(2)采用孔径为10μm的尼龙材质滤膜抽滤水样，抽滤后折叠滤膜浸没在装有95％乙醇的1.5mL EP管中，‑20℃长期保存；(3)将各个水样的滤膜单独提取DNA，提取的DNA置于‑20℃冷冻保存；(4)从长江江豚线粒体D‑Loop区域设计1对特异性引物，进行实时荧光定量PCR扩增，其中：正向引物，5’‑TATGTCCACTAGCCCTTCATAACCATTA‑3’；反向引物，5’‑AGATCATTATTTAGCTACCCCCACAAGC‑3’；(5)将长江江豚DNA依次稀释，形成100～10‑56个浓度梯度的DNA模板，进行real time PCR，荧光染料为SYBR Green I，建立标准曲线，检测所设计引物的特异性；(6)以步骤(3)提取的环境DNA为模板，进行real time PCR，判断检测样品。
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