[发明专利]匹多莫德分散片的微生物限度检查方法

摘要

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种匹多莫德分散片的微生物限度检查方法。菌液制备，供试液制备，需氧菌、霉菌和酵母菌总数的测定，试验组菌落数减去供试品组菌落数的值与菌液组菌落数的比值在0.5～2范围内即为合格，大肠埃希菌的检查。本发明能够防止样品在检验过程中假阴性的出现，降低患者用药安全风险。

主权项

1.一种匹多莫德分散片的微生物限度检查方法，其特征在于步骤如下：(1)菌液制备分别制备金黄色葡萄球菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液；(2)供试液制备取匹多莫德分散片供试品10g，置于无菌均质袋中，加100ml的45℃pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液，用均质器拍打1min，摇匀，作为1：10的供试液；(3)需氧菌、霉菌和酵母菌总数的测定①供试品组取1:10的供试液1ml加入到薄膜过滤器中，用300ml pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液冲洗，分3次冲洗，贴于胰酪大豆琼脂培养基上，平皿倒置30～35℃培养5天；取1:10的供试液1ml注皿倒入沙氏葡萄糖琼脂培养基，平皿倒置20～25℃培养7天；②菌液组取pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液9.9ml和0.1ml菌液混匀，取1ml注皿；其中，金黄色葡萄球菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到胰酪大豆胨琼脂培养基中，平皿倒置30～35℃培养3天；白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到沙氏葡萄糖琼脂培养基中，平皿倒置20～25℃培养5天；③试验组取1:10的供试液9.9ml和0.1ml菌液混匀，取1ml注皿；其中，金黄色葡萄球菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到胰酪大豆胨琼脂培养基中，平皿倒置30～35℃培养3天；白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到沙氏葡萄糖琼脂培养基中，平皿倒置20～25℃培养5天；④各平皿培养后进行需氧菌、霉菌和酵母菌总数的测定，试验组菌落数减去供试品组菌落数的值与菌液组菌落数的比值在0.5～2范围内即为合格；(4)大肠埃希菌的检查①菌液制备：制备大肠埃希菌菌悬液；②检查方法：供试品组：取1：10供试液10ml，加入100mlTSB培养基中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定供试品未检出大肠埃希菌；试验组：取1：10供试液10ml及不大于100cfu大肠埃希菌加入100mlTSB培养基中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定试验组未检出大肠埃希菌；阳性对照组：取pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液10ml及不大于100cfu大肠埃希菌加入100mlTSB培养基中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定阳性对照组未检出大肠埃希菌；阴性对照组：取pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液10ml加入100mlTSB培养基中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定阴性对照组未检出大肠埃希菌。