[发明专利]SmartBac杆状病毒表达系统及其应用

摘要

本发明公开了一种SmartBac杆状病毒表达系统及其应用。该系统可包括受体质粒(含片段A或者含片段B和C)和供体质粒(含片段D)；片段A含启动子、蛋白酶编码序列、蛋白酶切割位点、待表达目的物编码基因的插入区和终止序列；片段B含启动子、蛋白酶编码序列和终止序列；片段C含启动子、待表达目的物编码基因的插入区和终止序列；片段D含启动子、待表达目的物编码基因的插入区和终止序列。本发明还提供三种克隆的策略以实现分子量小于600kDa的蛋白质复合物表达、分子量大于600kDa的蛋白质复合物表达及高效筛选最适添加纯化标签的亚基。本发明对于在昆虫细胞中重组表达组分复杂、分子量较大的蛋白质复合物具有重要意义。

主权项

1.SmartBac杆状病毒表达系统，为如下任一：/n(A)SmartBac杆状病毒表达系统A，包括受体质粒和供体质粒；所述受体质粒和所述供体质粒能够发生重组融合为一个质粒；/n所述受体质粒为受体质粒甲和/或受体质粒乙；/n所述受体质粒甲上含有DNA片段A；所述DNA片段A自上游到下游依次包含：启动子A、蛋白酶的编码基因序列、所述蛋白酶的切割位点识别序列、待表达目的物的编码基因的插入区，以及终止序列A；/n所述受体质粒乙上含有DNA片段B和DNA片段C；所述DNA片段B自上游到下游依次包含：启动子B、所述蛋白酶的编码基因序列，以及终止序列B；所述DNA片段C自上游到下游依次包含：启动子C、待表达目的物的编码基因的插入区，以及终止序列C；/n所述供体质粒上含有DNA片段D；所述DNA片段D自上游到下游依次包含：启动子D、待表达目的物的编码基因的插入区，以及终止序列D；/n所述目的物为蛋白或蛋白亚基或蛋白片段或多肽或多肽片段；/n(B)SmartBac杆状病毒表达系统B，包括受体质粒和供体质粒；所述受体质粒和所述供体质粒能够发生重组融合为一个质粒；/n所述受体质粒上含有DNA片段A；所述DNA片段A自上游到下游依次包含：启动子A、待表达目的物的编码基因的插入区，以及终止序列A；/n所述供体质粒为供体质粒甲和/或供体质粒乙；/n所述供体质粒甲上含有DNA片段B；所述DNA片段B自上游到下游依次包含：启动子B、蛋白酶的编码基因序列、所述蛋白酶的切割位点识别序列、待表达目的物的编码基因的插入区，以及终止序列B；/n所述供体质粒乙上含有DNA片段C和DNA片段D；所述DNA片段C自上游到下游依次包含：启动子C、所述蛋白酶的编码基因序列，以及终止序列C；所述DNA片段D自上游到下游依次包含：启动子D、待表达目的物的编码基因的插入区，以及终止序列D；/n所述目的物为蛋白或蛋白亚基或蛋白片段或多肽或多肽片段；/n(D)SmartBac杆状病毒表达系统D，与所述SmartBac杆状病毒表达系统A或所述SmartBac杆状病毒表达系统B相比，差别仅在于：将其中的所述待表达目的物的编码基因的插入区替换为两两之间由所述蛋白酶的切割位点识别序列间隔开来的若干个插入区，每个插入区用于插入一个所述待表达目的物的编码基因；/n在所述(A)或(B)或(D)中，所述受体质粒和所述供体质粒上均含有位点特异性重组酶的识别序列；所述受体质粒中含有非条件型复制起点；所述供体质粒中含有条件型复制起点。/n