[发明专利]一种用于miRNA定量的改进型通用茎环引物及其定量方法在审
| 申请号： | 201711433279.2 | 申请日： | 2017-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN108165622A | 公开（公告）日： | 2018-06-15 |
| 发明（设计）人： | 邓盾;马现永;史圣楠;田志梅 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院动物科学研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 广州知友专利商标代理有限公司 44104 | 代理人： | 宣国华;刘艳丽 |
| 地址： | 510650 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于miRNA定量的改进型通用茎环引物，其核苷酸序列是由如SEQ ID NO：1所示的碱基序列与8个简并碱基组成，使用该茎环引物能进行序列不同的miRNA的反转录，其中8个简并碱基代表8个简并碱基代表：(A/C/G/T)(A/C/G/T)(A/C/G/T)(A/C/G/T)(A/C/G/T)(A/C/G/T)(A/C/G/T)(A/C/G/T)，使用该茎环引物能进行序列不同的miRNA的反转录。该茎环引物反转录效率高，荧光定量结果准确。还公开了采用上述茎环引物进行miRNA定量的方法。 1 | ||
| 搜索关键词： | 茎环引物 简并碱基 反转录 改进型 核苷酸序列 碱基序列 荧光定量 通用 | ||
【主权项】：
1.一种用于miRNA定量的改进型通用茎环引物，其特征是：其核苷酸序列是由如SEQ ID NO：1所示的碱基序列与8个简并碱基组成，使用该茎环引物能进行序列不同的miRNA的反转录，其中8个简并碱基代表：(A/C/G/T)(A/C/G/T)(A/C/G/T)(A/C/G/T)(A/C/G/T)(A/C/G/T)(A/C/G/T)(A/C/G/T)。2.采用权利要求1所述的茎环引物进行miRNA定量的方法，其特征是包括以下步骤：对不同的miRNA采用权利要求1中所述的茎环引物进行反转录，获得cDNA，然后采用qPCR引物进行qPCR反应，获得miRNA的定量结果。3.根据权利要求2所述的茎环引物进行miRNA定量的方法，其特征是：所述的qPCR引物包括正向引物和反向引物，所述的正向引物由5～8个随机碱基和18个与miRNA互补的碱基构成，所述的反向引物的碱基序列如SEQ ID NO：2所示。4.根据权利要求2所述的茎环引物进行miRNA定量的方法，其特征是：qPCR反应时的反应体系共20μL，包括10μL的2×SYBR Green Mix(thermo)，1μL的正向引物和1μL的反向引物，2μL的cDNA，6μL的水。5.根据权利要求2所述的茎环引物进行miRNA定量的方法，其特征是：qPCR反应时的反应条件为50℃2min，95℃2min预变性，95℃15s变性，50～65℃退火15s，72℃延伸1min，共40个循环。
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