[发明专利]一种两步法建立间充质干细胞软骨分化后骨关节炎样细胞模型的方法有效
| 申请号： | 201711378098.4 | 申请日： | 2017-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN108048394B | 公开（公告）日： | 2020-11-03 |
| 发明（设计）人： | 汪晖;陈廖斌;齐勇建;杨旭;何波 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 彭劲松 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种两步法建立间充质干细胞软骨定向分化后骨关节炎细胞模型的方法。该方法首先诱导间充质干细胞定向分化为关节软骨细胞，然后采用IL‑1β体外诱导所得软骨细胞建立骨关节炎模型。本发明首次使用两步法建立软骨定向分化后骨关节炎模型，通过考察软骨细胞形态学和表型基因aggrecan、Col2α1表达改变，确定了溶液的最佳使用浓度和细胞诱导时间。本方法操作容易、成本较低，可用于间充质干细胞软骨定向分化后的细胞质量评估、成年骨关节炎易感的早期预警、骨关节炎药物作用靶标的验证以及药物毒性/药效的筛选等相关研究。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 步法 建立 间充质 干细胞 软骨 分化 骨关节炎 细胞 模型 方法 | ||
【主权项】：
1.一种建立间充质干细胞软骨定向分化后骨关节炎样细胞模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)建立间充质干细胞软骨细胞定向分化模型：采用第3代间充质干细胞在体外37℃、湿度95％、CO2 浓度5％的细胞培养箱内培养21天，其间隔天更换软骨分化培养基一次，将间充质干细胞向软骨定向分化，获得软骨细胞，不限所用支架；2)使用含重组人IL-1β的DMEM/F12培养基处理步骤1)定向分化后的细胞进行骨关节炎造模；3)模型的评估：如果检测到步骤2)建立的细胞模型中软骨表型基因aggrecan、Col2α1的表达下降以及阿利新蓝、番红O染色变浅，则该模型建立成功。
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