[发明专利]猪流行性腹泻病毒2型毒株的培养及灭活疫苗的研制

摘要

本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒2型毒株的筛选方法，并且利用该方法筛选的毒株制备疫苗。其制备疫苗的步骤是：1)培养Vero细胞，接入猪流行性腹泻病毒；将培养物反复冻融离心，收集上清冻存备用；2)加入甲醛溶液至甲醛，摇匀后放入37℃温箱中，每隔3h摇匀一次，灭活48h；3)加入硫代硫酸钠溶液至终浓度为千分之三，以中和甲醛，将中和过的病毒液抽取少许按正常接毒方式接入细胞，进行培养；4)在灭活的病毒上清液中加入灭菌剂，充分摇匀后分装，即为猪流行性腹泻病毒灭活苗。本发明所制备的灭活疫苗与现有猪流感疫苗不同，其可以免疫基因2型的猪流行性腹泻病毒，并且该疫苗可以产生较高的中和抗体，对仔猪有较强的保护作用。

主权项

猪流行性腹泻病毒2型毒株的筛选方法，其步骤是：1)用PBS将猪场采集的RT‑PCR诊断为阳性粪拭子重悬，离心后取重悬液上清接种Vero细胞，37℃培养观察；2)将接种粪拭子悬液后出现细胞病变的Vero细胞冻融后，离心取上清，接种Vero细胞，37℃恒温培养，36h后用抗PEDV S1蛋白的单克隆抗体作为一抗、羊抗鼠二抗进行IFA鉴定；3)鉴定为阳性的病毒液取上清，接种Vero细胞；37℃恒温培养72h，冻融细胞离心取上清，‑80℃保存病毒液。