[发明专利]一种类蛇毒三肽的液相合成方法

摘要

本发明公开了一种类蛇毒三肽的液相合成方法，该方法将Boc‑β‑Ala‑OH、N‑乙基‑5‑苯基异噁唑‑3’‑磺酸内盐和H‑Pro‑OMe·HCl反应得Boc‑β‑Ala‑Pro‑OMe，Boc‑β‑Ala‑Pro‑OMe与LiOH反应得Boc‑β‑Ala‑Pro‑OH；然后采用相同方法以Boc‑β‑Ala‑Pro‑OH和H‑DAB(Boc)‑OMe·HCl合成Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑OH；再将Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑OH、1‑羟基苯丙三唑、N,N‑二异丙基碳二亚胺和苄胺反应得Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl，最后用三氟乙酸脱去Boc保护基并分离纯化，得纯度大于95％的类蛇毒三肽。本发明以廉价易得的氨基酸甲酯为原料，每步肽键合成生成的副产物有水溶性，易于分离，为类蛇毒三肽合成提供了一种工艺简便、成本较低的液相合成方法。

主权项

一种类蛇毒三肽的液相合成方法，其特征在于所述方法由以下步骤组成：(1)合成Boc‑β‑Ala‑Pro‑OMe以硝基甲烷为溶剂，将Boc‑β‑Ala‑OH、三乙胺、N‑乙基‑5‑苯基异噁唑‑3’‑磺酸内盐、H‑Pro‑OMe·HCl在室温条件下搅拌反应10～12小时，得到Boc‑β‑Ala‑Pro‑OMe；(2)合成Boc‑β‑Ala‑Pro‑OH将Boc‑β‑Ala‑Pro‑OMe加入四氢呋喃与甲醇、质量分数为5％～10％的LiOH水溶液体积比为2:1:1的混合溶液中，室温搅拌反应2～4小时，用1mol/L盐酸调节pH至4～5，旋转蒸发浓缩，浓缩液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相用无水硫酸钠干燥后减压浓缩，干燥，得到Boc‑β‑Ala‑Pro‑OH；(3)合成Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑OMe按照步骤(1)的方法将Boc‑β‑Ala‑Pro‑OH、三乙胺、N‑乙基‑5‑苯基异噁唑‑3’‑磺酸内盐和H‑DAB(Boc)‑OMe·HCl反应，得到Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑OMe；(4)合成Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑OH按照步骤(2)的方法用四氢呋喃与甲醇、质量分数为5％～10％的LiOH水溶液体积比为2:1:1的混合溶液处理Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑OMe，得到Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑OH；(5)合成Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl以四氢呋喃为溶剂，将Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑OH、1‑羟基苯丙三唑、N,N‑二异丙基碳二亚胺、苄胺在氮气保护下搅拌反应2～4小时，旋转蒸发除四氢呋喃，加入用乙酸乙酯溶解，用0.5mol/L盐酸溶液洗涤2次，水洗涤至中性，有机相减压浓缩至干，得到Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl；(6)合成H‑β‑Ala‑Pro‑DAB‑NH‑Bzl将Boc‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Boc)‑NH‑Bzl加入三氟乙酸与水体积比为95:5的混合液中，室温搅拌反应1小时，浓缩反应液，将浓缩液加入冷乙醚中析出沉淀，离心除去上清，沉淀经乙醚洗涤、离心后真空干燥，得到H‑β‑Ala‑Pro‑DAB‑NH‑Bzl粗品；将H‑β‑Ala‑Pro‑DAB‑NH‑Bzl粗品经HPLC纯化、冷冻干燥，得到H‑β‑Ala‑Pro‑DAB‑NH‑Bzl，即类蛇毒三肽。