[发明专利]一种基因定量分析的方法

摘要

本发明公开了一种基因定量分析的方法，步骤是：（1）取初始样本，使用蛋白质分解酶处理细胞后，作相关基因预扩增；（2）以扩增的基因模板作定量PCR试验，检测相关基因起始拷贝数量，获得原始CT数据，即CT值；（3）依定量PCR仪器和试剂，设定可信赖的最大CT极限值，简称maxCT值；（4）依计算公式：eCT=maxCT‑CT，将获得的CT值转化成eCT；（5）根据获得的eCT，对单细胞或少量细胞的基因表达或基因拷贝数定量作分析比较，获得单细胞相关基因定量数据，用于细胞功能分析、定性鉴定、来源鉴定等科学和临床诊断信息。该方法简单易行、直接，使检测结果更加真实、明了，更加有利于清晰的比较，以达到更好的细胞定性和分类效果。

主权项

一种基因定量分析的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取初始样本，使用蛋白质分解酶处理细胞后，检测RNA时，直接合成cDNA，然后使用PCR方法定性预扩增基因模板；检测DNA时，则直接使用PCR方法定性预扩增基因模板；所述的初始样本为单个细胞或少量细胞；所述的基因预扩增，是定性基因的扩增，或是广谱性的基因扩增；（2）以步骤（1）获得的定性扩增的基因模板作定量PCR试验，使用定量PCR引物、探针和DNA聚合酶反应，检测相关基因的起始拷贝数量，获得原始的CT数据，即CT值；（3）依定量PCR仪器和试剂，设定可信赖的最大CT极限值，简称：maxCT值，设定maxCT值为35‑45之间，亦可依仪器和试剂的敏感度而定；（4）依计算公式：eCT=maxCT‑CT，将步骤（2）获得的CT值转化成eCT，eCT为负数的，全定为0；（5）根据步骤（4）获得的eCT，对单细胞或少量细胞的基因表达或基因拷贝数定量作分析比较，获得单细胞相关基因定量数据，用于细胞功能分析、细胞定性鉴定、细胞来源鉴定科学和临床诊断信息。