[发明专利]一种人脐带间充质干细胞分离培养方法

摘要

本发明属于生物制品细胞分离培养技术领域，尤其涉及一种人脐带间充质干细胞分离培养方法，包括如下步骤取足月剖宫产胎儿离体脐带，放入无菌的组织保存液中保存；用生理盐水冲洗数次，去除残留血迹；用带齿镊子剔除组织块的两条脐静脉和两条脐动脉，用无菌剪刀将华通胶完全剪碎；将步骤剪碎的华通胶转移至培养基中振荡后离心；将离心沉淀部分转移至细胞培养瓶中；培养第5‑6天可见部分细胞从组织小块周围爬出，之后每隔3天更换一次培养基，继续培养；在第14天左右可见细胞融合度达80％以上，呈漩涡式生长；之后每3天传一代，可得到充足的间充质干细胞。本发明比传统的组织块法更加容易，干细胞纯度和得率更高。

主权项

一种人脐带间充质干细胞分离培养方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)取足月剖宫产胎儿离体脐带，放入无菌的组织保存液中在4℃条件下保存12‑24小时；(2)在无菌条件下从无菌的组织保存液中取出脐带，用生理盐水冲洗数次，去除残留血迹；(3)用无菌剪刀将步骤(2)中洗净的脐带剪成2‑3cm的小块，将小块纵向剪开，用带齿镊子剔除组织块的两条脐静脉和两条脐动脉，剥离华通胶放入生理盐水中，用无菌剪刀将华通胶完全剪碎；(4)将步骤(3)中剪碎的华通胶转移至含DMEM/F12培养基中振荡后离心，离心机速度为1500～2000转/分钟，离心5～10分钟弃去上清，此操作重复3遍；(5)将离心沉淀部分转移至细胞培养瓶中，添加含有体积分数为15％FBS的DMEM/F12培养基，并置于温度为37℃，CO2含量为5％的培养箱中培养；(6)每天观察细胞的生长情况，培养第5‑6天可见部分细胞从组织小块周围爬出，将培养瓶中上清全部吸出，补加与吸出上清体积相同的体积分数为13％FBS的DMEM/F12培养基，之后每隔3天更换一次培养基，继续培养；(7)在第14天左右可见细胞融合度达80％以上，呈漩涡式生长；用胰蛋白酶或者EDTA消化，按1:3传代，补加含有体积分数为10％FBS的DMEM/F12培养基；之后每3天传一代，可得到充足的间充质干细胞。