[发明专利]海马神经干细胞、神经元分离培养方法

摘要

本发明提供一种海马神经干细胞、神经元分离培养方法，该方法使用改良新生鼠神经细胞培育流程，使用改良培养基，对新生鼠海马组织进行原代培养，并可直接制作细胞爬片，24小时后提取细胞培养上清转移至另一培养体系可直接进行神经干细胞培养，原体系内贴壁细胞更换改良神经元培养基可进行神经元培养。本发明可在处死一次动物基础上同时完成稳定的神经干细胞和神经元培养，节约实验动物；能够培养密度及形态均较好的神经元，可用于神经元的相关体外实验体系构建；培养出的神经干细胞增殖性良好，传代稳定，分化潜能保持较好。

主权项

一种海马神经干细胞、神经元分离培养方法，其特征在于，该方法包括：先用多聚赖氨酸铺板，结束后用双蒸水冲洗，再自然晾干；处死出生当天或第一天的小鼠，用酒精喷洒小鼠，将小鼠大脑收集于盛有培养液+青霉素/链霉素溶液的离心管中，置于冰上；在显微镜下去除脑膜，分离完整的海马组织，将收集好的组织转移至盛有培养液+青霉素/链霉素溶液的离心管中，置于冰上；进行离心，弃掉上清，加入胰蛋白酶进行消化；离心结束，加胎牛血清中止消化；用经抛光处理的玻璃移液管进行吹打；离心，弃掉上清，加入神经干细胞培养基重悬组织并吹匀；将重悬液经滤器过滤；对过滤后液体进行细胞计数，种板；种板后，吸出神经干细胞培养基转移至培养瓶；孔板中换成神经元培养基。