[发明专利]具有抗抑制活性的重组木聚糖酶XynB的构建方法在审
| 申请号： | 201711034272.3 | 申请日： | 2017-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN107586787A | 公开（公告）日： | 2018-01-16 |
| 发明（设计）人： | 莫毅;梁方方;蒋和生;叶健;郭亚芬 | 申请（专利权）人： | 梁方方 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N9/24;C12R1/19 |
| 代理公司： | 广州市越秀区海心联合专利代理事务所(普通合伙)44295 | 代理人： | 王洪娟,马赟斋 |
| 地址： | 530000 广西壮族自治*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了具有抗抑制活性的重组木聚糖酶XynB的构建方法，提取小麦全基因组，并采用以下特异引物扩增小麦的Xyn B基因第三外显子内的活性位点序列，电泳切胶回收DNA片段经限制性内切酶EcoR V和EcoR I酶切后与载体pET30a+构建重组表达载体，经转化菌转化后获得重组质粒pET30a‑Xyn B，重组质粒pET30a‑Xyn B转化至工程菌，经培养后获取单克隆菌落，转至培养基中培养并诱导蛋白表达，获得重组木聚糖酶XynB；其中，所述的特异引物为正向引物5’‑TCGATATCATGCAGCTGGACAACGCCTT‑3’，反向引物5’‑TCGAATTCTGCGTCCGTCTTCCACTCCC‑3’。所得重组木聚糖酶XynB活性强，取其未经过纯化的酶液进行DNS检测，以桦木木聚糖为底物推算，重组木聚糖酶Xyn B的比活力能达到67.30U/mg。 | ||
| 搜索关键词： | 具有 抑制 活性 重组 聚糖 xynb 构建 方法 | ||
【主权项】：
具有抗抑制活性的重组木聚糖酶XynB的构建方法，其特征是，提取小麦全基因组，并采用以下特异引物扩增小麦的Xyn B基因第三外显子内的活性位点序列，电泳切胶回收DNA片段经限制性内切酶EcoR V和EcoR I酶切后与载体pET30a+构建重组表达载体，经转化菌转化后获得重组质粒pET30a‑Xyn B，重组质粒pET30a‑Xyn B转化至工程菌，经培养后获取单克隆菌落，转至培养基中培养并诱导蛋白表达，获得重组木聚糖酶XynB；其中，所述的特异引物为：正向引物：5’‑TCGATATCATGCAGCTGGACAACGCCTT‑3’，划线部分为EcoR V限制性内切酶位点，反向引物：5’‑TCGAATTCTGCGTCCGTCTTCCACTCCC‑3’，划线部分为EcoR I限制性内切酶位点。
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