[发明专利]荧光精确定量DNA折纸结构完整度的方法

摘要

本发明涉及一种精准定量DNA折纸结构完整程度的方法，包括DNA三角形折纸结构的合成和荧光光谱定量DNA三角折纸随离子浓度变化而产生的结构变化。具体涉及以Eva Green荧光染料为定量试剂，通过荧光强度，精确定量DNA三角折纸结构在环境改变时，结构的完整程度。本发明属于纳米生物材料和生物检测领域。本发明的优点在于：提出了一种荧光精确定量DNA折纸结构完整度的方法；该定量方法精确、简便、易于评估操作，可以满足未来DNA纳米折纸结构应用的需求。

主权项

一种荧光精确定量DNA折纸结构完整度的方法，其特征在于，具体为以下步骤：（1）DNA三角形折纸结构的合成将208条订书钉链（Sequence No.1‑208）等量地溶解到MilliQ水中，使每条短链的最终浓度为200nM；将M13mp18 单链DNA（100nM）与混好的208条短链(200nM)以摩尔浓度比1：10的比例混合在1×TAE‑Mg2+溶液中（三羟甲基氨基甲烷（Tris），40mM；醋酸, 20mM；乙二胺四乙酸（EDTA）, 2 mM；醋酸镁, 12.5mM；pH 8.0），其中M13mp18 单链DNA的最终浓度为5 nM，短链最终浓度为50nM；将混好的溶液放入PCR仪中，设定反应程序95℃持续3分钟，然后 缓慢降温至4℃，降温速率为0.2℃/10s；（2）荧光光谱定量DNA三角折纸随离子浓度变化而产生的结构变化将上述合成的DNA三角折纸结构置于超滤离心管中纯化，转速3000g，10分钟，离心3次，清除多余的订书钉链；将纯化好的DNA三角折纸的终浓度定为2nM，取DNA三角折纸溶液，加入20×Eva Green，加入缓冲溶液，测量其荧光强度；控制Mg2+浓度为原缓冲液中的1/10，静置5分钟至2小时，测量其荧光强度；恢复溶液中Mg2+浓度，再次测量其荧光强度。