[发明专利]类似嵌合抗原受体修饰的CIK及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种类似嵌合抗原受体修饰的CIK及其制备方法与应用。本发明制备类似嵌合抗原受体修饰的CIK细胞制剂的方法包括：利用多个串联的miRNA对CIK中CTLA4 mRNA的5’‑UTR、3’‑UTR和/或胞内区进行沉默，并表达CTLA4胞外区‑CD28‑41BB‑CD3融合蛋白，从而制得所述类似嵌合抗原受体修饰的CIK细胞制剂。实验证明，该载体可大大降低CIK细胞中内源CTLA4的表达，而表达的CTLA4胞外区‑CD28‑41BB‑CD3融合蛋白在与T细胞表面的B7结合之后激活CIK细胞，从而显著提高CIK细胞的肿瘤杀伤活性。

主权项

1.一种制备类似嵌合抗原受体修饰的CIK细胞制剂的方法，包括如下步骤：向 CIK中转入重组载体，所述重组载体能敲低内源性CTLA4表达，并且能表达CTLA4胞外区-CD28-41BB-CD3融合蛋白，培养后收获细胞，从而制得所述类似嵌合抗原受体修饰的CIK细胞制剂；/n所述CTLA4胞外区-CD28-41BB-CD3融合蛋白自N端到C端依次由CTLA4的胞外区、CD28的跨膜区和胞内区、4-1BB的胞内区和CD3的胞内区组成；/n所述重组载体上含有10个串联的靶向CTLA4 mRNA的5’-UTR、3’-UTR和/或胞内区的miRNA的编码基因；/n所述10个串联的靶向CTLA4 mRNA的5’-UTR、3’-UTR和/或胞内区的miRNA，分别如下：/n（1）miRNA-CTLA4-30：核苷酸序列为将序列表中序列1的第6384-6442位或序列2的第5629-5687位中的T替换为U后所得序列；/n（2）miRNA-CTLA4-56：核苷酸序列为将序列表中序列1的第6522-6580位或序列2的第5767-5865位中的T替换为U后所得序列；/n（3）miRNA-CTLA4-119：核苷酸序列为将序列表中序列1的第6660-6718位或序列2的第5905-5963位中的T替换为U后所得序列；/n（4）miRNA-CTLA4-968：核苷酸序列为将序列表中序列1的第6978-6856位或序列2的第6043-6101位中的T替换为U后所得序列；/n（5）miRNA-CTLA4-1158：核苷酸序列为将序列表中序列1的第6936-6994位或序列2的第6181-6239位中的T替换为U后所得序列；/n（6）miRNA-CTLA4-1201：核苷酸序列为将序列表中序列1的第7074-7132位或序列2的第6319-6377位中的T替换为U后所得序列；/n（7）miRNA-CTLA4-1690：核苷酸序列为将序列表中序列1的第7212-7270位或序列2的第6457-6515位中的T替换为U后所得序列；/n（8）miRNA-CTLA4-1717：核苷酸序列为将序列表中序列1的第7350-7408位或序列2的第6595-6653位中的T替换为U后所得序列；/n（9）miRNA-CTLA4-1759：核苷酸序列为将序列表中序列1的第7488-7546位或序列2的第6733-6791位中的T替换为U后所得序列；/n（10）miRNA-CTLA4-1770：核苷酸序列为将序列表中序列1的第7626-7684位或序列2的第6871-6929位中的T替换为U后所得序列；/n所述重组载体的序列为序列表中序列1或序列2。/n