[发明专利]一种制备家鸽肠壁肌间神经丛内NOS神经元样品的方法

摘要

本发明涉及一种制备家鸽肠壁肌间神经丛内NOS神经元样品的方法，步骤如下：(1)制备待观察肠道；(2)取待观察肠道，制备固定后样品；(3)将固定后样品截段后，剥离肌层，然后剥离神经丛上的纵形肌，置于磷酸缓冲液中保存，制得待染样品；(4)将待染样品经磷酸缓冲液冲洗后，浸入封闭液室温封闭，然后浸入一抗溶液中，室温孵育，制得一抗样品；(5)将一抗样品浸入山羊抗兔IgG的溶液中，摇床孵育，避光显色，然后经脱水、封片，即得。本发明首次采用肠壁全层铺片‑NOS免疫组化技术制备家鸽肠壁肌间神经丛内NOS神经元样品，制备过程中通过在制备样品前注射肌松药、剥离纵形肌，较为容易的实现了环形肌与纵形肌的分离。

主权项

一种制备家鸽肠壁肌间神经丛内NOS神经元样品的方法，其特征在于，步骤如下：(1)按0.04～0.06mg/kg向家鸽注射肌松药，5～30min后处死家鸽，取家鸽肠道，清理肠道内容物，制得待观察肠道；(2)取步骤(1)制得的待观察肠道，结扎小肠的一端，用含有多聚甲醛质量百分比浓度为3.6～4.4％的磷酸缓冲液灌注后，结扎小肠的另一端，在4℃条件下，置于含有多聚甲醛质量百分比浓度为3.6～4.4％的磷酸缓冲液中固定6～8h，转至含200～350g/L蔗糖的磷酸缓冲溶液中，4℃条件下脱水过夜，制得固定后样品；(3)将步骤(2)制得的固定后样品截段后，剥离肌层，将肌层浆膜面向下平铺于载玻片上，然后剥离神经丛上的纵形肌，保留环形肌层，置于磷酸缓冲液中保存，制得待染样品；(4)将步骤(3)制得的待染样品经磷酸缓冲液冲洗后，室温置于质量浓度为2.5～3.5％的H2O2中25～35min，然后经磷酸缓冲液冲洗后，浸入封闭液室温封闭0.8～1.2h，然后浸入含有质量百分比浓度为0.2～0.5％的一抗溶液中，4℃过夜，然后室温孵育0.8～1.2h，PBST冲洗，制得一抗样品；所述一抗为兔抗NOS抗体；所述封闭液为每百毫升PBST溶液含有5毫升山羊血清的溶液；(5)将步骤(4)制得的一抗样品浸入含有质量百分比浓度为0.1％的山羊抗兔IgG的溶液中，摇床孵育1.5～2.5h，分别用PBST溶液和PBS溶液冲洗，经DAB溶液避光显色8～12min，PBS冲洗，然后经脱水、封片，即得。