[发明专利]一种高通量桃叶片基因组DNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种高通量桃叶片基因组DNA的提取方法，精简了提取步骤和水浴方法，每人每天可提取1024个样品DNA，克服了传统DNA提取方法程序复杂、耗时长的缺点，为大规模提取桃叶片基因组DNA提取奠定了基础。该方法提取的基因组DNA可用于SSR分析、基于HRM的SNP分型扩增、Sanger测序以及其他分子标记分析等后续研究。

主权项

一种高通量桃叶片基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：称取桃叶片分别置于48组、每个离心管体积为1.2ml的八连排离心管中，在每个离心管中加入直径4mm的研磨钢珠，加入液氮冷冻后放入样品研磨仪中研磨100s至桃叶片粉碎，研磨完成后在放入液氮中冷冻；步骤2：加入500μL、质量浓度为2%的CTAB，在60℃烘箱中放置30min，期间每隔10min轻轻摇匀；步骤3：采用台式离心机，在转速500r/min下离心5min，防止研磨物溢出导致样品间污染；步骤4：用300ml量程的8通道移液器向八连排离心管中加入氯仿和异戊醇的混合液，直至1.2ml离心管的满载线，然后轻轻上下晃动摇匀5min；所述混合液中氯仿和异戊醇的体积比为24:1；步骤5：放入冷冻离心机，在4℃、转速4000r/min条件下离心10min，吸取上清液，将约150μL上清液转入200μL的96孔PCR板，然后加入与上清液等体积的经过预冷的无水乙醇，轻轻上下晃动摇匀，在‑20℃冰箱中放置1h；步骤6：将96孔PCR板放入冷冻离心机中，在4℃、转速4000r/min条件下离心10min，弃上清液；步骤7：在带有沉淀的96孔PCR板中加入200μL、质量浓度为70%的乙醇，放入冷冻离心机，在转速1000r/min下离心5min，然后用质量浓度为70%的乙醇洗涤沉淀2次，再用无水乙醇洗涤沉淀1次，在室温下自然晾干；步骤8：在室温下自然晾干后，在96孔PCR板中加入150μL的0.1×TE缓冲液溶解沉淀，同时加入0.5μL的RNaseA，去除RNA污染，即得桃叶片基因组DNA。