[发明专利]一种细胞内MicroRNA的检测探针及合成方法和检测方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种细胞内MicroRNA的检测探针及合成方法和检测方法及试剂盒。通过修饰TPE‑Py‑N3的DNA探针分子与待测的细胞内MicroRNA相结合，在DNA外切酶Ⅲ的作用下，探针中亲水的脱氧核糖核酸会被水解，剩余的疏水性TPE‑Py‑N3分子会聚集发光，靶标MicroRNA会释放出来，再次与探针结合，探针再次被水解，循环多次后黄色荧光增强，从而检测出细胞内的MicroRNA。本发明还包括检测细胞内MicroRNA的检测试剂盒，可快速检测出细胞内MicroRNA。

主权项

一种细胞内MicroRNA的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制转染液：转染液由A液和B液组成，A液为脂质体2000溶解在Opti‑MEM培养基中；B液为DNA外切酶III和探针分子溶解在Opti‑MEM培养基；将混匀的A液和B液进行充分混合得到转染液；所述探针分子为5，端修饰有聚集诱导发光化合物的DNA片段；(2)待检测细胞的培养：将待检测细胞悬浮液置于共聚焦皿中培养，待细胞贴壁后，去掉培养基，加入Opti‑MEM培养基后在37℃条件下培养1‑3h后，去掉上层培养基并清洗得到待检测细胞；(3)转染：将步骤(1)中的转染液加入到步骤(2)中所得的待检测细胞中，于32℃‑37℃温度下转染50‑60分钟；使所述转染液中的探针分子充分转染进待检测细胞中；(4)将步骤(3)的反应液去掉未转染进细胞的转染液，用缓冲液冲洗后，加入缓冲液，用激光共聚焦显微镜对细胞荧光成像，得到所述待测细胞内MicroRNA的检测结果。