[发明专利]检测耳聋易感基因突变的试剂盒及其应用

摘要

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种检测耳聋易感基因突变的试剂盒及其应用。该试剂盒内的PCR反应液包括17条引物单链(SEQ ID NO：1～17所示)和11条探针(SEQ ID NO：19～29所示)，可以在单管PCR体系中同时检测4个耳聋易感基因的9个突变位点的基因型及1个内参基因，PCR扩增结束后经荧光PCR熔解曲线分析获知样本基因型，整个操作可在2～3小时完成，操作步骤少、耗时短、单管检测位点多、通量高、突变覆盖率高；此外本发明的试剂盒采用均相检测、闭管操作，减少了PCR产物的污染，且检测特异性高，结果易于判读。

主权项

一种检测耳聋易感基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括PCR反应液，所述PCR反应液包括：用于扩增12SrRNA基因中m.1555A>G位点和m.1494C>T位点的第一上游引物和第一下游引物，用于扩增内参基因RPP30的第二上游引物和第二下游引物，用于扩增SLC26A4基因中c.2168A＞G位点的第三上游引物和第三下游引物，用于扩增GJB3基因中c.538C＞T位点的第四上游引物和第四下游引物，用于扩增SLC26A4基因中IVS7‑2A>G位点的第五上游引物和第五下游引物，用于扩增GJB2基因中c.176_191del16位点、c.235delC位点的第六上游引物和第六下游引物，用于扩增GJB2基因中c.299_300delAT位点的第七上游引物和第七下游引物，用于扩增GJB2基因中c.35delG位点的第八上游引物和第八下游引物，用于不对称PCR扩增的通用引物即第九引物，以及检测所述m.1555A>G位点的第一探针，检测所述m.1494C>T位点的第二探针，检测所述内参基因RPP30的第三探针，检测所述c.2168A＞G位点的第四探针，检测所述c.538C＞T位点的第五探针，检测所述IVS7‑2A>G位点的第六探针，检测所述c.176_191del16位点的第七和第八探针，检测所述c.235delC位点的第九探针，检测所述c.299_300delAT位点的第十探针，检测所述c.35delG位点的第十一探针，其中，所述第一上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，所述第一下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示，所述第二上游引物的序列如SEQ ID NO:3所示，所述第二下游引物的序列如SEQ ID NO:4所示，所述第三上游引物的序列如SEQ ID NO:5所示，所述第三下游引物的序列如SEQ ID NO:6所示，所述第四上游引物的序列如SEQ ID NO:7所示，所述第四下游引物的序列如SEQ ID NO:8所示，所述第五上游引物的序列如SEQ ID NO:9所示，所述第五下游引物的序列如SEQ ID NO:10所示，所述第六上游引物的序列如SEQ ID NO:11所示，所述第六下游引物的序列如SEQ ID NO:12所示，所述第七上游引物的序列如SEQ ID NO:13所示，所述第七下游引物的序列如SEQ ID NO:14所示，所述第八上游引物的序列如SEQ ID NO:15所示，所述第八下游引物的序列如SEQ ID NO:16所示，所述第九引物的序列如SEQ ID NO:17所示，所述第一探针的序列如SEQ ID NO:19所示，所述第二探针的序列如SEQ ID NO:20所示，所述第三探针的序列如SEQ ID NO:21所示，所述第四探针的序列如SEQ ID NO:22所示，所述第五探针的序列如SEQ ID NO:23所示，所述第六探针的序列如SEQ ID NO:24所示，所述第七探针的序列如SEQ ID NO:25所示，所述第八探针的序列如SEQ ID NO:26所示，所述第九探针的序列如SEQ ID NO:27所示，所述第十探针的序列如SEQ ID NO:28所示，所述第十一探针的序列如SEQ ID NO:29所示，且十一条所述探针的5’端具有荧光报告基团，3’端具有荧光淬灭基团。