[发明专利]一种直接定量检测循环miRNA的RT-qPCR方法有效
| 申请号： | 201710442989.5 | 申请日： | 2017-06-13 |
| 公开（公告）号： | CN107385014B | 公开（公告）日： | 2020-12-22 |
| 发明（设计）人： | 苟德明;牛燕琴;康康 | 申请（专利权）人： | 深圳大学 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 广州容大知识产权代理事务所(普通合伙) 44326 | 代理人： | 刘新年 |
| 地址： | 518060 广东省深圳市南*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种不需提取核酸，直接检测血清或血浆中循环microRNA(miRNA)的实时荧光定量RT‑qPCR方法。所述方法包括：S1：裂解血清或血浆中的外泌体及miRNA蛋白复合体，离心后得到循环miRNA粗提物；S2：miRNA加尾及逆转录；S3：RT‑qPCR定量检测。本发明miRNA直接荧光定量RT‑qPCR扩增方法[Direct S‑Poly(T)Plus,简称DSPP]中，不需要提取核酸，且miRNA的Poly(A)加尾和逆转录将在一个反应体系中同步完成，操作简便，缩短时间，可在95分钟内完成cDNA的制备。该技术体系灵敏度与stem‑loop方法相比提高数十甚至上百倍，建立了一种非常简便、灵敏、高效、快捷、廉价的miRNA检测的技术体系。该技术体系尤其适合于临床应用推广及其从miRNA丰度较低的生物体液样本中检测miRNA。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 直接 定量 检测 循环 mirna rt qpcr 方法 | ||
【主权项】：
一种直接定量检测循环miRNA的RT‑qPCR方法，其特征在于，所述方法，包含以下步骤：S1、裂解离心：利用裂解用试剂将样本中的蛋白复合体中充分裂解，使miRNA从样本中释放出来；短暂离心后，所得上清液即为粗提RNA；S2、加尾逆转录：将所述步骤S1中所获得的粗提RNA进行加Poly(A)尾及S‑Poly(T)特异性逆转录；S3、RT‑qPCR定量检测：以步骤S2中获得的逆转录产物cDNA为模板进行RT‑qPCR定量检测。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于深圳大学，未经深圳大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201710442989.5/，转载请声明来源钻瓜专利网。
