[发明专利]一种固相合成戈那瑞林的方法

摘要

一种固相合成戈那瑞林的方法，其属于医药合成领域。该方法采用高效的裂解后能够保留氨基的Rink Amide AM树脂作为固相载体，在HBTU/HOBT/DIPEA的作用下，从C端到N端逐一延伸偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到全保护肽树脂，再通过一步法进行裂解与脱保护得到戈那瑞林粗品，经过分离制备得到戈那瑞林精品。该方法选择采用高效的氨基树脂、缩合剂、碱试剂完成整个合成过程，整个方法操作简单，温和可控且效率高，适于规模化制备戈那瑞林。

主权项

一种固相合成戈那瑞林的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）活化保护氨基酸溶液按保护氨基酸：缩合剂摩尔比为1:1‑6溶解于N，N‑二甲基甲酰胺；搅拌下慢慢加入有机碱，于室温环境中搅拌反应，得到活化后的保护氨基酸溶液，备用；有机碱：保护氨基酸的摩尔比为1‑6:1；所述保护氨基酸为N‑芴甲氧羰基‑甘氨酸、N‑芴甲氧羰基‑脯氨酸、N‑芴甲氧羰基‑精氨酸、N‑芴甲氧羰基‑亮氨酸、N‑芴甲氧羰基‑酪氨酸、N‑芴甲氧羰基‑丝氨酸、N‑芴甲氧羰基‑色氨酸、N‑芴甲氧羰基‑组氨酸或N‑芴甲氧羰基‑谷氨酸；所述缩合剂为N,N‑二异丙基碳二亚胺、六氟磷酸苯并三唑‑1‑基‑氧基三吡咯烷基磷、苯并三氮唑‑N,N,N',N'‑四甲基脲六氟磷酸盐、O‑苯并三氮唑‑N,N,N',N'‑四甲基脲四氟硼酸酯中的一种或几种；所述有机碱为N,N‑二异丙基乙胺、三乙胺、2,4,6‑三甲基吡啶或N‑甲基吗啡啉中的一种或几种；（2）氨酸的接入取Rink Amide AM树脂N,N‑二甲基甲酰胺溶胀，加入活化后的N‑芴甲氧羰基‑甘氨酸溶液，室温搅拌反应0.5‑3小时，过滤洗涤，得到Fmoc‑Gly‑Rink Amide AM树脂；用10‑30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Gly‑Rink Amide AM树脂；取Gly‑Rink Amide AM树脂，加入活化后的N‑芴甲氧羰基‑脯氨酸，室温搅拌反应0.5‑3小时，过滤洗涤，得到Fmoc‑ Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；用10‑30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；取Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂，加入活化后的N‑芴甲氧羰基‑亮氨酸，室温搅拌反应0.5‑3小时，过滤洗涤，得到Fmoc‑ Arg (Pbf)‑ Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；用10‑30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；取Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂，加入活化后的N‑芴甲氧羰基‑精氨酸，室温搅拌反应0.5‑3小时，过滤洗涤，得到Fmoc‑ Leu‑ Arg (Pbf)‑ Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；用10‑30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Leu ‑Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；取Leu ‑Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂，加入活化后的N‑芴甲氧羰基‑甘氨酸，室温搅拌反应0.5‑3小时，过滤洗涤，得到Fmoc‑ Gly‑ Leu‑ Arg (Pbf)‑ Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；用10‑30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Gly‑Leu ‑Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；取Gly‑Leu ‑Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂，加入活化后的N‑芴甲氧羰基‑酪氨酸，室温搅拌反应0.5‑3小时，过滤洗涤，得到Fmoc‑ Tyr (tBu)‑ Gly‑ Leu‑ Arg (Pbf)‑ Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；用10‑30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Tyr (tBu)‑Gly‑Leu ‑Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；取Tyr (tBu)‑Gly‑Leu ‑Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂，加入活化后的N‑芴甲氧羰基‑丝氨酸，室温搅拌反应0.5‑3小时，过滤洗涤，得到Fmoc‑ Ser (tBu)‑Tyr (tBu)‑ Gly‑ Leu‑ Arg (Pbf)‑ Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；用10‑30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Ser (tBu)‑Tyr (tBu)‑Gly‑Leu ‑Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；取Ser (tBu)‑Tyr (tBu)‑Gly‑Leu ‑Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂，加入活化后的N‑芴甲氧羰基‑色氨酸，室温搅拌反应0.5‑3小时，过滤洗涤，得到Fmoc‑ Trp (Boc) ‑ Ser (tBu)‑Tyr (tBu)‑ Gly‑ Leu‑ Arg (Pbf)‑ Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；用10‑30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Trp (Boc) ‑Ser (tBu)‑Tyr (tBu)‑Gly‑Leu ‑Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；取Trp (Boc) ‑Ser (tBu)‑Tyr (tBu)‑Gly‑Leu ‑Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂，加入活化后的N‑芴甲氧羰基‑组氨酸，室温搅拌反应0.5‑3小时，过滤洗涤，得到Fmoc‑ His (Trt)‑ Trp (Boc) ‑ Ser (tBu)‑Tyr (tBu)‑ Gly‑ Leu‑ Arg (Pbf)‑ Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；用10‑30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到His (Trt)‑Trp (Boc) ‑Ser (tBu)‑Tyr (tBu)‑Gly‑Leu ‑Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；取His (Trt)‑Trp (Boc) ‑Ser (tBu)‑Tyr (tBu)‑Gly‑Leu ‑Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂，加入pGlu‑OH，室温搅拌反应0.5‑3小时，过滤洗涤，得到pGlu ‑Trp (Boc) ‑ Ser (tBu)‑Tyr (tBu)‑ Gly‑ Leu‑ Arg (Pbf)‑ Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；用10‑30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到戈那瑞林肽树脂：pGlu‑Trp (Boc) ‑Ser (tBu)‑Tyr (tBu)‑Gly‑Leu ‑Arg (Pbf)‑Pro ‑Gly‑Rink Amide AM树脂；（3）酸解、纯化向戈那瑞林肽树脂中加入酸解液，搅拌反应6小时，过滤洗涤，合并滤液后减压浓缩；加入无水乙醚沉淀，洗涤、抽干，得类白色粉末为戈那瑞林粗品；酸解液：戈那瑞林肽树脂为10‑12mL：1g；所述酸解液为体积分数为5％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液；再采用高效液相色谱法进行纯化、转盐后，得到戈那瑞林精品。