[发明专利]一种高效快速分离T‑DNA插入位点侧翼序列的方法及其用途在审
| 申请号： | 201710434000.6 | 申请日： | 2017-06-09 |
| 公开（公告）号： | CN107190003A | 公开（公告）日： | 2017-09-22 |
| 发明（设计）人： | 凌飞;崔莹 | 申请（专利权）人： | 武汉天问生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所11569 | 代理人： | 刘奇 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种高效快速分离T‑DNA插入位点侧翼序列的方法，包括提取农杆菌介导的转基因植株的基因组DNA；将基因组DNA片段化，DNA修复、加A和连接后，利用磁珠进行片段选择后进行文库构建，构建的文库与T‑DNA边界序列进行杂交捕获以后进行PCR富集；对文库进行高通量测序，对测序数据进行生物信息学分析，获取T‑DNA插入位点。本发明利用靶标DNA捕获，专门针对T‑DNA边界序列进行低通量测序，本发明的方法克服了现有侧翼序列分离技术通量低，效率低和成功率低的不足，结合DNA捕获和第二代测序技术，特异性对T‑DNA边界序列进行测序并通过简单分析就能获得T‑DNA插入位点的侧翼序列，具有高效，经济和分析简单的特点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 快速 分离 dna 插入 侧翼 序列 方法 及其 用途 | ||
【主权项】：
一种高效快速分离T‑DNA插入位点侧翼序列的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取农杆菌介导的转基因植株的基因组DNA；2)将基因组DNA片段化，DNA修复、加A和连接后，利用磁珠进行片段选择后进行文库构建，构建的文库与T‑DNA边界序列进行杂交捕获以后进行PCR富集；3)对文库进行高通量测序，对测序数据进行生物信息学分析，获取T‑DNA插入位点。
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