[发明专利]一种盐生草叶片分生组织高效再生体系建立的方法

摘要

本发明提供一种植物叶片高效再生体系建立的方法，其主要步骤如下：1.盐生草无菌苗叶片分生组织的获得，以无菌培养15‑20d的盐生草叶片分生组织为外植体；2.愈伤组织的诱导培养；3.愈伤组织的继代培养；4.愈伤组织的分化及再生培养；5.丛生芽的生根培养获得再生植株。该方法能够快速高效地建立盐生草再生体系，操作简单，成本廉价，再生植株生长良好，以期为盐生草遗传改良研究奠定基础。

主权项

1.一种盐生草叶片分生组织高效再生体系建立的方法，其特征在于步骤为：（1）盐生草无菌叶片分生组织的获得：常规灭菌后的盐生草种子进行无菌培养15‑20d，取无菌苗的叶片分生组织作为诱导愈伤的外植体；（2）愈伤组织的诱导：将步骤（1）获得的无菌外植体接种于诱导愈伤组织的培养基，培养15‑20d，诱导愈伤组织的发生；其中，诱导愈伤组织的培养基由MS基本培养基，2.0‑2.5mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸（2，4‑D），0.5‑1g/L Polyvinyl pyrrolidone (PVP)，10‑15mg/L 谷氨酰胺，5‑6g/L琼脂，20‑30g/L蔗糖组成，pH=5.8‑6.0；（3）愈伤组织的继代培养：将步骤（2）获得的嫩绿色愈伤组织转接至继代培养基，培养15‑20d，使其增殖；其中，继代培养基由MS基本培养基，0.5‑1 mg/L 2，4‑D，0.5‑1g/L Polyvinyl pyrrolidone (PVP)，10‑15mg/L 谷氨酰胺，5‑6g/L琼脂，20‑30g/L蔗糖组成，pH=5.8‑6.0；（4）愈伤组织的分化及再生培养：将步骤（3）获得的深绿色愈伤组织切割成直径0.3‑0.5cm的小块，转接至分化培养基，培养20‑25d，产生不定芽，然后将不定芽转接至相同的分化培养基连续培养1‑2次，至生成丛生芽；其中，分化培养基由MS基本培养基，0.5‑1 mg/L 6‑BA，1.5‑2 mg/L KT，0.15‑0.25 mg/L NAA，2‑2.5g/L酪蛋白，0.5‑1g/L Polyvinyl pyrrolidone (PVP)，10‑15mg/L 谷氨酰胺，5‑6g/L琼脂，20‑30g/L蔗糖组成，pH=5.8‑6.0；（5）丛生芽的生根培养：将步骤（4）获得的丛生芽转接至生根培养基，培养25‑30d，最终获得生长良好的再生植株，其中，生根培养基由MS基本培养基，4‑5g/L琼脂，20‑30g/L蔗糖组成，pH=5.8‑6.0。