[发明专利]一种饲养层细胞、培养方法及应用有效
| 申请号： | 201710380719.6 | 申请日： | 2017-05-25 |
| 公开（公告）号： | CN107236703B | 公开（公告）日： | 2021-06-01 |
| 发明（设计）人： | 赵姝灿;陈志胜;李东升;张晓芳;郑桂纯 | 申请（专利权）人： | 佛山科学技术学院 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 王国标 |
| 地址： | 528000 广东省佛山*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种饲养层细胞的培养方法，包括步骤：1)鸡骨髓间充质干细胞的获取；2)饲养层的制备。本发明打破了传统的以成纤维细胞作为饲养层的传统方法，避免了多次制备不同代次的成纤维细胞造成的不确定性与不稳定性；避免了异源细胞作为饲养层后产生的不利影响；所使用的细胞仍保持在早期胚胎期其扩增能力强和生存周期长；简化了实验操作步骤，节省了时间，降低实验成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 饲养 细胞 培养 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种饲养层细胞的培养方法，包括以下步骤：1)鸡骨髓间充质干细胞的获取：取1至10天龄的鸡的股骨和胫骨，以KO‑DMEM培养基冲洗出骨内的骨髓细胞，过筛网制成单细胞悬液，将单细胞悬液放入离心管，以1000rpm/min离心5min，弃去上层脂肪等杂质后添加cBM‑MSC完全培养基进行培养；2)饲养层的制备：将鸡骨髓间充质干细胞用含有0.02％EDTA的0.25％浓度的胰蛋白酶进行消化，调整细胞密度为5×105个/mL，注入24孔板制成饲养层，待长成80％‑90％汇合时，用丝裂霉素‑C消化处理后进行离心，离心后再次调整细胞密度为5×105个/mL，随后接种于培养板中，置于培养箱中以37℃，5％CO2的环境条件培养至少24h。
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