[发明专利]一种检测苄青霉素的方法

摘要

本发明提供了一种检测苄青霉素的方法，本发明中苄青霉素的检测是在均相溶液中实现的，通过两步循环的方式来实现信号的放大，从而实现苄青霉素的高灵敏检测，并获得较低的检测下限。

主权项

1.一种检测苄青霉素的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将装有各DNA链的离心管，放入离心机中12000R/min，离心10min，加入灭菌水，再放在振荡器中震荡30s，使链融和均匀；（2）将灭菌水，10×的buffer缓冲液、10μM HAP1和待测目标物加入离心管中，震荡30s，放入37℃的恒温箱中孵育1h；（3）将步骤(2)中孵育的离心管拿出，再将10μM S1和5μM S2、2μLphi29 DNA聚合酶，2μL dNTPs加入这个离心管中，震荡30s，放入37℃的恒温箱中孵育1h；（4）将步骤（3）中孵育的离心管拿出加入5μM HAP2和2μL Nt.BbvCI内切酶于离心管中，震荡30s，放入37℃的恒温箱中孵育1h；（5）将步骤（4）中孵育的离心管拿出，加入氯化铁血红素，震荡30s，放入37℃的恒温箱中孵育1h，孵育后加入H2O2和ABTS，采用紫外分光光度计检测；步骤（1）所述的各DNA链，其序列分别是：HAP1：5′‑ GCG GGC GGT TGT ATA GCG GTT TTT TTT TTG CCC GCA TTT AGT TT ‑3’ （SEQ ID NO.1）；S1：5’‑ AAA AGC TGA GGA CTA TAG C ‑3’(SEQ ID NO.2)；HAP2：5’‑ TAG TCC TCA GCT TTT GGG TTT TGG GTT TTG GGT TTT GGG ACT A ‑3’(SEQ ID NO.3)；S2：5’‑ GCT ATA GTC CTC AAT CTA ATA AAC TAA ATG CG ‑3’(SEQ ID NO.4)；步骤（2）所述HAP1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；步骤（3）所述S1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；步骤（4）所述HAP2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；步骤（3）所述S2的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。