[发明专利]一种猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒及其检测方法，属于生物领域，以解决现有血清抗体ELISA试剂盒是只适合单一病原产生的抗体检测，无法同时检测多种病原产生的血清抗体的问题。本发明利用SPA蛋白具有特异性结合猪血清中所有IgG抗体的生物学功能。SPA蛋白可以特异性结合猪血清样品中的所有类型IgG抗体，如果待检测样品中存在抗三种病原编码的4种蛋白的抗体，也能够与SPA蛋白发生特异性结合，实现一种抗原同时捕获3种病原感染或免疫后产生的4血清IgG抗体(抗CSFV的E2蛋白抗体、抗PCV2的Cap蛋白抗体和抗PrV的gB和gE蛋白抗体的)的目的。

主权项

1.一种用猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒进行检测的方法，所述方法为非疾病诊断方法，其特征在于：使用猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒，包括预包被SPA蛋白的检测板、血清样品稀释液、洗涤液、显色液、终止液、四种病原的阴阳性标准对照血清、以及HRP分别标记的CSFV的 E2抗原、PCV2的Cap抗原、PrV的gB和gE抗原；所述HRP标记的CSFV的E2抗原、PCV2的Cap抗原、PrV的gB和PrV的gE抗原使用浓度分别为1∶4000、1∶4000，1∶4000、1∶2000，其对应的质量浓度为0.1μg/mL‑15μg/mL；具体包括以下步骤：(1）加入血清样本：将待检测血清样本、阴阳性标准对照血清均以原倍浓度100µL/孔加入对应孔中，阴阳性标准对照血清做复孔；密封,室温作用60min；(2）去除非特异性反应：用质量浓度为1% EDTA的去污洗涤液和50 mmoL/L的磷酸盐缓冲液，以100μL/孔室温作用5 min，弃去孔内液体，磷酸盐缓冲液的pH 值为7.2；(3）洗板：弃净孔内残余EDTA和PBS液体，用200‑300μL/孔的1×PBST洗涤液连续洗涤4次，最后一次弃净孔内液体，拍干；(4）加入HRP‑标记抗原：根据需要检测病原的抗体，加入已滴定好HRP标记抗原，100µL/孔，37 ℃作用1h，洗涤；(5） 加入底物显色：以100μL/孔的用量加入TMB底物缓冲液，室温避光显色15 min，以100μL/孔的用量加入终止液；(6）结果判定：试验成立条件：计算阳性对照、阴性标准对照血清各孔的平均吸光度值OD450nm，当阳性标准血清平均OD450≥1.0，阴性标准血清OD450≤0.20，判定为试验结果成立；判定：当待测样品OD450/阴性标准血清OD450≥2.10，判定该血清样品为检测病原的抗体阳性；当待测样品OD450/阴性标准血清OD450＜2.10，判定该血清样品为检测的病原抗体阴性。