[发明专利]一种定量检测牛羊乳中蛋白质含量的方法

摘要

本发明公开了一种定量检测牛羊乳中蛋白质含量的方法，包括以下步骤：以与待测牛羊乳样品中待测蛋白质的特异肽相对应的同位素特异肽为内标物，加入蛋白酶酶解得到酶解物；对所述酶解物中验证肽进行检测，并根据检测结果鉴定待测蛋白质的酶解效果；本发明用待测蛋白质的验证肽鉴定蛋白质的酶解效果，若酶解物中含有验证肽时，则待测蛋白质样品未完全酶解释放得到特异肽，待测蛋白质样品还须优化酶解操作并重复上述验证肽的检测；反之，则待测蛋白质样品完全酶解释放得到特异肽。因此本发明中可以对于待测蛋白质是否酶解完全释放得到所对应的特异肽进行验证，以获得准确的特异肽的浓度，进而准确的换算出待测蛋白质的含量。

主权项

1.一种定量检测牛羊乳中蛋白质含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以与待测牛羊乳样品中加入蛋白酶酶解得到酶解物；(2)对所述酶解物中验证肽和特异肽进行检测，并根据检测结果验证待测蛋白质样品的酶解效果；若通过酶解效果验证，表示特异肽已完全从待测蛋白质样品酶解得到，则用所获得的特异肽浓度乘以待测蛋白质样品的分子量获得蛋白质的质量浓度；若未通过酶解效果验证，表示特异肽未完全从待测蛋白质样品酶解得到，则将酶解物再次进行酶解优化处理；所述验证肽中至少含有一个或一个以上在待测蛋白质中最后被所述酶所酶解的位点；或，所述验证肽为所述特异肽向N端或者C端延长至一个或一个以上酶解位点的多肽；(3)待特异肽已完全从待测蛋白质样品酶解得到后，将所述酶解物经由质谱检测；(4)制作待测蛋白质的特异肽标准品溶液浓度的标准曲线；(5)将步骤(3)得到的检测结果代入步骤(4)所述标准曲线中，获得样品的特异肽摩尔浓度，然后按下式计算获得待测蛋白质的质量浓度；待测蛋白质的质量浓度＝待测样品中待测蛋白特异肽摩尔浓度×待测蛋白质摩尔质量；所述待测蛋白质与其特异肽的对应关系为：