[发明专利]一种将外源基因定点插入到家蚕W染色体中的方法

摘要

本发明属于生物技术领域（基因组编辑）领域，涉及一种利用类转录激活因子核酸酶介导的家蚕W染色体定点插入外源基因的方法及其在家蚕雌雄鉴别中的应用。一种将外源基因定点插入到家蚕W染色体的方法，具体就是通过对家蚕基因组数据库中W染色体分子标记进行分析，筛选TALENs打靶位点，设计合成TALENs mRNA表达质粒，构建一个表达外源（报告）基因（如红色荧光蛋白）的同源重组载体质粒，利用显微注射技术将TALENs mRNA和同源重组（供体）质粒注射到家蚕Nistara品系卵中，将外源基因定点插入到家蚕W染色体中，使外源基因仅在雌性个体内表达，从而实现快速高效鉴别雌雄的目的。

主权项

一种将外源基因定点插入到家蚕W染色体中的方法，其特征在于：该方法包括以下的步骤：1）筛选家蚕 W 染色体中适合定点插入外源基因的靶序列，所述靶序列的核苷酸序列如 SEQ ID NO.3 所示；2）筛选家蚕W染色体中适合定点插入外源基因的靶点，所述靶点序列如SEQ ID NO.4所示；3）根据家蚕W染色体中适合定点插入外源基因的靶点序列，设计构建TALENs介导的基因定点打靶体系，介导外源基因定点插入到W染色体中。