[发明专利]一种兔MSTN基因的编辑方法在审
| 申请号： | 201710191095.3 | 申请日： | 2017-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN106947780A | 公开（公告）日： | 2017-07-14 |
| 发明（设计）人： | 成勇;张婷 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N9/22;A01K67/027 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种兔MSTN基因编辑方法。该方法是利用CRISPR/Cas9在兔MSTN基因座定点实现基因修饰；包括根据兔MSTN基因靶序列位点设计和引导序列、利用引导序列构建2种CRISPR/Cas9二合一质粒mstn‑sgRNA1和mstn‑sgRNA2、体外转录出sgRNA‑1、sgRNA‑2和Cas9mRNA并形成两种二合一复合物的分子生物学材料，再利用该分子生物学材料制备转基因兔，诱导MSTN基因编码序列第3外显子4881‑4903及4796‑4818位核苷酸序列的突变与缺失的步骤。应用本发明方法可实现MSTN基因突变和基因敲除，获得MSTN表达缺失或降低的基因编辑兔，本发明可用于瘦肉型兔基因编辑育种。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 mstn 基因 编辑 方法 | ||
【主权项】：
一种兔MSTN基因的编辑方法，其特征在于，利用CRISPR/Cas9在兔MSTN基因座定点实现基因修饰；具体是：(1)根据如SEQ ID NO.1所示的新西兰兔MSTN基因靶序列，针对4881‑4903、4796‑4818位核苷酸序列设计sgRNA‑1和sgRNA‑2的引导序列，(2)利用引导序列与YSYCRISPR/Cas9二合一质粒构建试剂盒构建2种CRISPR/Cas9二合一质粒，将它们分别命名为mstn‑sgRNA1和mstn‑sgRNA2(3)mstn‑sgRNA1和mstn‑sgRNA2质粒分别做为PCR扩增sgRNA‑1、sgRNA‑2和Cas9 mRNA的转录模板，根据转录模板体外转录出sgRNA‑1、sgRNA‑2和Cas9mRNA；sgRNA‑1或sgRNA‑2分别与Cas9mRNA的二合一复合物组成了激活新西兰兔MSTN基因4881‑4903、4796‑4818位核苷酸序列突变及新西兰兔MSTN基因基因敲除的分子生物学材料，(4)利用该分子生物学材料制备转基因兔，诱导MSTN基因编码序列第3外显子4881‑4903及4796‑4818位核苷酸序列的突变与缺失。
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