[发明专利]快速鉴定食用向日葵杂交种三瑞6号真实性和纯度的方法

摘要

本发明公布了一种快速鉴定食用向日葵杂交种三瑞6号真实性和纯度的方法，通过在大量的SSR引物中筛选出ORS‑12、ORS‑959、ORS‑966和ORS‑1086，并在上述引物下获得了适于以食用向日葵杂交种三瑞6号及其亲本标准向日葵种子A06‑0284‑6和R08‑43的基因组DNA为模板的PCR扩增反应的最优组合，对比通过凝胶电泳处理获得的食用向日葵杂交种三瑞6号及其标准向日葵种子A06‑0284‑6和R08‑43的电泳图谱，判定所述食用向日葵杂交种三瑞6号真实性和纯度的鉴定，该方法方便、快捷，操作步骤简单，能够在短时间内对大量的待测食用向日葵杂交种三瑞6号进行快速鉴定，测定结果准确。

主权项

一种快速鉴定食用向日葵杂交种三瑞6号真实性和纯度的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)分别取由待测食用向日葵杂交种三瑞6号、以及标准向日葵种子A06‑0284‑6和R08‑43种植得到的向日葵真叶为材料，利用常规CTAB法提取上述各食用向日葵的基因组DNA；(2)以步骤(1)所得的各所述基因组DNA为模板，选择引物ORS‑12、ORS‑959、ORS‑966和ORS‑1086中的至少一种，分别对各所述基因组DNA进行PCR扩增；ORS‑12‑F:5’‑GCTTTGAGAAACCGCTTCAC‑3’；ORS‑12‑R:5’‑TTGATATGGTAACTAACGAACACAA‑3’；ORS‑959‑F:5’‑CCGCTAAGTATAAACCGCCTATT‑3’；ORS‑959‑R:5’‑CGTCCTCTTCGCATCAATCTTAT‑3’；ORS‑966‑F:5’‑TCAAAGATGTCACCATAGGAAAGA‑3’；ORS‑966‑R:5’‑ATTTGCTGAGACCATGAGCATC‑3’；ORS‑1086‑F:5’‑TTGTTTGTCGCACACTCAAGATT‑3’；ORS‑1086‑R:5’‑ATTATCGGCACATCTTTGGATTT‑3’。(3)分别将步骤(2)获得的各样本PCR扩增产物进行6％尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳处理，得到所述食用向日葵杂交种三瑞6号以及其亲本标准向日葵种子A06‑0284‑6和R08‑43的电泳图谱；(4)对比上述杂交种三瑞6号以及其亲本标准种子A06‑0284‑6和R08‑43的电泳图谱，若所述杂交种三瑞6号同时具有其亲本标准种子A06‑0284‑6和R08‑43的特征谱带，则判定所述待测食用向日葵杂交种三瑞6号为真实；反之，为假；所述待测食用向日葵杂交种三瑞6号纯度按照公式所述杂交种三瑞6号同时具有其亲本标准种子A06‑0284‑6和R08‑43的特征谱带的样本种子数/检测的样本种子总数×100％计算得到。