[发明专利]一种高危人乳头瘤病毒分型检测方法与试剂盒

摘要

本发明提供一种高危人乳头瘤病毒（HPV）分型检测方法与试剂盒，该方法采用多对引物、多条探针的荧光核酸扩增方法，并结合熔解曲线分析，可在单波长荧光通道中实现多种靶核酸序列检测。通过该方法，以HPV基因组L1段序列为靶序列设计HPV特异性引物和TaqMan探针，设计与TaqMan探针不完全互补的PCO杂交探针，杂交探针的3’端可根据目的进行荧光淬灭基团标记或者非荧光淬灭基团标记，杂交探针标记后3’端不能再延伸，由此研制了含有上述引物探针以及荧光PCR其它组分的HPV基因分型试剂盒，通过荧光PCR扩增结合单波长熔解曲线分析能鉴别HPV16、18、31、52、59型。

主权项

一种高危人乳头瘤病毒基因分型检测方法与试剂盒，其特征在于，采用人乳头瘤病毒通用引物SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8以及SEQ ID No.9，和人乳头瘤病毒16、18、31、52、59型特异性TaqMan探针SEQ ID No.15、SEQ ID No.16、SEQ ID No.17、SEQ ID No.18和SEQ ID No.19，以及在上述TaqMan探针互补序列基础上设计且与探针序列不完全配对的PCO探针SEQ ID No.20、SEQ ID No.21和SEQ ID No.22，要求TaqMan探针和PCO探针标记相同荧光发光基团、TaqMan探针3’端标记荧光淬灭基团、PCO探针3’端进行封闭标记，通过荧光PCR扩增技术结合单波长熔解曲线分析技术在单管反应中实现人乳头瘤病毒16、18、31、52、59型核酸分型检测。